饲料中维生素D3含量检测.pdf

饲料中维生素D3含量检测 科标化工分析检测中心通过市场调查和实验结果，发现养殖户为了解决家禽缺乏维生素D3所带来的“弱 腿病”、生长率和饲料利用率下降、产蛋率下降等问题，在饲料中添加维生素D3，为了更好的监测饲料中维 生素D3含量，科标化工分析检测中心现开发了其检测方法。 科标化工分析检测中心可依照ISO、ASTM、DIN、GB、HB 等标准完成食品、饲料、药品、纺织品、 农业、高分子材料、生物产品、建筑材料以及微生物产品理化性能、力学性能、电气性能等测试。中心通过 了中国国家认证认可监督管理委员会和中国合格评定国家认可委员会的二合一（CMA、CNAS）实验室认证 认可，能出具权威的第三方检测报告。 饲料中维生素D3的含量检测(高效液相色谱法) 一、实验原理 科标化工分析检测中心参照国标GB/T17818-2010 饲料中维生素D3的测定 高效液相色谱法中第一法皂 化提取法，试样经粉碎、过筛后，用碱溶液皂化，乙醚提取维生素D3，蒸发乙醚，残渣溶解于甲醇，取部分 溶液用C18小柱净化，收集滤液，蒸发至干，用正己烷溶解，反相液相色谱柱分离测定，紫外检测器检测， 外标法定量分析。 二、仪器和试剂 试验地点：青岛科标化工分析检测中心实验室。仪器：高效液相色谱仪带紫外检测器，AS3120超声波发 生器；试剂：甲醇为色谱纯试剂，实验用水为超纯水，维生素D3标准品（购于日本CPE公司）。 三、试验方法 1. 皂化 称取样品（配合饲料称取10g~20g，浓缩饲料10g，维生素预混饲料或复合预混合饲料1g~5g）精确至 0.0001g，置于250ml圆底烧瓶中，加入50ml5g/LL-抗血酸乙醇溶液，混匀，加入10ml氢氧化钾溶液，混匀， 置于沸水浴上回流30min，不时震荡防止样品粘附在壁上。皂化结束，分别用5ml 无水乙醇、5ml 蒸馏水自 冷凝管顶端冲洗其内部，取出烧瓶冷却至室温。 2. 提取 定量转移全部皂化液于盛有100ml 无水乙醚的500ml 分液漏斗中，用40ml 水分3次冲洗圆底烧瓶并入 分液漏斗，用160ml 乙醚分三次萃取，合并乙醚相。用 100g/L 氯化钠溶液洗涤一次，再用200ml 水分2次 洗涤乙醚萃取液至中性。用无水硫酸钠脱水乙醚提取液，转移到250ml 棕色容量瓶中，加100mg2,6-二叔丁 基对甲酚使之溶解，定容。以上操作在避光通风柜中完成。 科标中心以“专心、专业、专注“为宗旨，致力于实现研究和应用的对接，从而推动化工行业的发展。 3、浓缩 取部分提取液用氮气吹干，残渣用正己烷溶解，溶液用 0.45µm 过滤膜过滤，收集滤液，上高效液相色 谱仪检测分析。 4、色谱条件 色谱柱：C18 色谱柱 150mm×4.6mm×5μm； 流动相：甲醇+水=95+5； 流速：1.0mL/min； 温度：室温； 进样量：20μL； 检测波长：264nm； 检测限：0.1mg/kg。 图1. 维生素D3标准品图谱 图2. 样品图谱 四、结果计算与评价 科标化工分析检测中心利用外标法计算维生素D3含量。同一检测者对同一样品同时两次平行测定所得 结果的相对偏差不大于10%。 科标中心以“专心、专业、专注“为宗旨，致力于实现研究和应用的对接，从而推动化工行业的发展。 附图： 1、样品称量 2、样品粉碎 科标中心以“专心、专业、专注“为宗旨，致力于实现研究和应用的对接，从而推动化工行业的发展。 3、高效液相色谱仪 4、测试图谱 科标中心以“专心、专业、专注“为宗旨，致力于实现研究和应用的对接，从而推动化工行业的发展。 科标中心以“专心、专业、专注“为宗旨，致力于实现研究和应用的对接，从而推动化工行业的发展。