第5次_4章-2幻灯片.pptVIP

2．双水相萃取法 双水相萃取法又称水溶液两相分配技术，双水相萃取法的主要优点是：每一水相中均有很高的含水量，为酶等生物物质提供了一个良好的环境；PEG等和无机盐对酶等无毒害作用，不会引起变性。 双水相萃取中使用的双水相一般由按一定百分比组成的互不相溶的盐溶液和高分子溶液或者两种互不相溶的高分子溶液组成。 各种双水相系统 聚合物P 聚合物Q或盐 聚丙二醇 甲基聚丙二醇，聚乙二醇，聚乙烯醇，聚乙烯吡咯烷酮，羟丙基葡聚糖，葡聚糖 聚乙二醇 聚乙烯醇，葡聚糖，聚蔗糖 甲基纤维素 羟甲基葡聚糖，葡聚糖 乙基羟乙基纤维素 葡聚糖 羟丙基葡聚糖 葡聚糖 聚蔗糖 葡聚糖 聚乙二醇 硫酸镁，硫酸铵，硫酸钠，甲酸钠，酒石酸钾钠 3．超临界流体萃取法 超临界流体：当温度和压力略超过或靠近某一物质的临界点时，其性质介于液体和气体之间 超临界流体萃取法也是一种溶剂萃取，以一种在超临界状态下的液体气体（超临界流体）为萃取剂。 根据分离的方法不同，可有三种情况：等压分离、等温分离、吸附剂分离。 流体名称 临界温度(℃) 临界压力 (Mpa) 临界密度 （g/ml） 乙烷C2H6 32.3 4.88 0.203 丙烷C3H8 96.9 4.26 0.220 丁烷C4H10 152.0 3.80 0.228 戊烷C5H12 296.7 3.28 0.232 乙烯C2H4 9.9 5.12 0.227 氨NH3 132.4 11.28 0.236 二氧化碳 CO2 31.1 7.38 0.46 二氧化硫 SO2 157.6 7.88 0.525 水H2O 374.3 22.11 0.326 笑气N2O 36.5 7.17 0.451 氟里昂C 28.8 3.90 0.578 某些超临界流体的超临界点和超临界密度 4．反胶束（团）萃取法 反胶团，又称反胶束，是指表面活性剂分散在连续有机相中自发形成的一种稳定的纳米级的聚集体。 反胶团萃取法是近年发展起来的另一种新型萃取分离技术，在分离生物大分子特别是分离蛋白质方面取得了很大的进展。反胶团萃取法具有成本低、溶剂可反复使用、萃取率和反萃取率都很高等突出的优点，另外此法还能解决胞内酶在非细胞环境中迅速失活的问题，而且由于构成反胶团的表面活性剂往往具有溶解细胞的能力，因此可用于直接从完整细胞中提取蛋白质和酶。 微团： 表面活性剂的极性头朝 外，疏水的尾部朝内，中 间形成非极性的“核” 水 非极性的“核” 极性“头” 非极性“尾” 反微团： 表面活性剂的极性头朝内，疏水的尾部向外，中间形成极性的“核” 有机溶剂 极性“头” 极性的“核” 非极性“尾” 反胶团萃取蛋白质示意图 蛋白质的溶解 a、水壳模型：蛋白质位于水池的中心，周围存在的水层将其与反胶团壁隔开； b、半岛模型：pro表面存在强烈疏水区，该区直接与有机相接触； c、pro吸附于反胶团内壁； d、pro疏水区与几个反胶团的疏水尾发生相互作用，被几个小反胶团所“溶解”。 五、结晶 结晶是指物质以晶体的状态从蒸汽或溶液中析出的过程。结晶既是酶是否纯净的标志（只有同类分子才能形成晶体），也是一种酶和杂蛋白分离的方法。 1.原理 酶从溶液中结晶析出是一个新的固相形成的过程，包括酶分子的凝聚和有规则地排列在一定晶格中；形成新的固相需要一定的表面自由能，当溶液达到饱和状态时开始结晶作用，但只有当达到过饱和状态时才可能析出结晶；因此结晶包括3个过程：形成过饱和溶液，形成晶核，晶体生长。需要注意的是过饱和状态的形成应该是一个缓慢的过程，否则会形成无规则的沉淀而不能形成晶体。 2. 结晶条件 1）酶的纯度 达到50%以上 2）酶的浓度 溶液浓度控制稍微过饱和的状态 3）结晶温度 低温下进行结晶（0-40C）； 4）溶液pH 应在酶的稳定范围内，一般选在被结晶的pI值附近； 5）离子强度 （ 如Ca 2+ , Mg 2+ 等） 6）晶核 7）结晶时间 3. 结晶方法 盐析结晶法、有机溶剂结晶法、透析平衡结晶法、等电点结晶法 Section 3 酶的浓缩与干燥 一、浓缩 浓缩就是从的低浓度酶液中除去部分水分或其它溶剂而成为高浓度酶液的过程。 真空蒸发浓缩 薄膜蒸发浓缩 二、干燥 干燥：将固体、半固体或浓缩液中水分（或其他溶剂）除去一部分，以获得含水量较少的固体过程。 真空干燥、冷冻干燥、喷雾干燥、气流干燥和吸附干燥。 三、酶的制剂与保存 酶的制剂与保存 液体酶制剂：一般将固体杂质去除后，直接制成或浓缩成粗酶液；不稳定，且成分复杂。 固体酶制剂：发酵液经杀菌后直接浓缩或喷雾干燥而成；有的是经过初步纯化后，加入淀粉等填充料而成；适合运输和短期保存，用于工业生产。 纯酶制剂：分离纯化后的酶液，经浓缩