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体外放射分析 ?特异分离法： 双抗法 固相分离法 葡萄球菌A蛋白（SPA） 补充：对分离方法的基本要求 1、使结合部分与游离部分尽可能完全分开 2、分离的成份便于放射性测量 3、分离效果不受外界干扰因素的影响 4、操作简便、分离迅速、重复性好 5、与游离标记物的非特异结合尽可能小 6、试剂来源广泛，经济价廉 RIA加样方法 1、平衡法：三种反应物同时加样 优：简便易掌握 重现性好 竞争反应较典型 缺：灵敏度不高 2、顺序加样法：Ag+Ab温育后再加*Ag 优：标准曲线起始段斜率高、灵敏度高 缺：曲线工作波度范围窄、重现性差 3、一天法：（特殊情况下使用） 测定值—真值 偏差=-----------------------------×100% 真值 偏差允许在±10%之内。? 注意：测定值应取高、中、低三个剂量区的样品分别求出高、中低三个剂量的回收率和偏差。 6、稳定性：指批间重复性。对曲线稳定性考核的常用指标有：ED25、ED50、ED75、B0%、NSB%等。 不同批实验中这些值应大体接近。 7、临床有效性：阳性率与临床诊断的符合率。 与正常值的确定有关。 上述几种指标间的关系；靶图。 若某点的CV%大于10%应做为坏点剔除。 * 分类： 1、? 竞争性： 放射免疫分析RIA 竞争性蛋白结合分析CPBA 放射受体分析RRA 放射酶分析 放射微生物分析 2、非竞争性： 免疫放射分析IRMA 一、放射免疫分析RIA 原理：P62 竞争机制： Ag(不定量) +Ab（有限量） 固定量*Ag 免疫结合反应形成免疫复合物 定量分析的数学基础： 免疫结合反应服从质量作用定律 P+Q===PQ [PQ] K= --------- [P][Q] K值大表示亲和力大 由质量作用定律推导的数学模型 [Q0] 1 [Q0] B2—B（1+ ------ + --------）+ ------- == 0 [P0] K[P0] [P0] ? [PQ] B == ----------×100% P0=Ag+*Ag PQ=*Ag—Ab [P0] Q0=Ab的初始含量 当*Ag为固定量时，P0为自变量（实际为Ag） P0与复合物B呈一定的函数关系 放免反应的定量依据： 剂量反应曲线或叫标准曲线 剂量反应曲线的含义 以已知的标准品为横坐标，以放射性复合物测定值的某种表达式做纵坐标，绘制剂量---反应曲线 P64图4—1 P74图4—13 曲线的斜率是关键因素，斜率不同精密度不同（P64图4—1） 斜率 = tg α（代表曲线或直线的倾斜度） 影响斜率的常见因素有以下几点： 1、Ab亲和力：K大，斜率也大 2、Ag用量：Ag少，斜率大 3、Ag的免疫活性：活性强，斜率大 4、*Ag的比活度和放化纯度：↑→↑ 5、Ab用量：B=33—50%斜率最大。 6、反应条件和温度（见后） 免疫反应条件要求： 1、PH：大多PH=7.5 2、离子强度：常用0.05—0.1M 3、反应温