淋巴细胞转化实验11.12.131.pptVIP

细胞培养技术 2011.12.13 细胞培养概述 细胞培养（cell culture）：从体内取出组织或细胞，在体外模拟体内的生理环境，在无菌、适宜温度和一定营养条件下使其生长，并维持其结构和功能的方法。 细胞培养技术是生命科学中常用的研究手段，亦是生命科学各研究领域的基础技术和基本技能。 细胞培养实验的基本要求 实验前准备：超净台紫外线消毒30min；无菌室每周消毒1-2次；所用器材要经过严格消毒；操作前用消毒液浸泡手或用75%酒精擦拭。 细胞培养条件 合成培养基：根据体内细胞生存所需的物质种类和数量，用化学物质模拟合成。 常用的培养基有RPMI-1640、DMEM、IMDM等。 血清：胎牛血清、新生牛血清、小牛血清。 抗菌素：抑制可能存在的细菌和霉菌的生长，而不影响细胞的生长。 　常用青、链霉素；庆大霉素等。 消化液（培养贴壁细胞用）：0.25%胰蛋白酶、EDTA液 pH调整液 NaHCO3溶液：常用浓度为5.6%和7.4% Hepes液：可较长时间保持较强的缓冲作用 培养条件：无菌、３７℃、５％ＣＯ２ 细胞培养基本技术 细胞原代培养：从供体获取组织细胞的首次培养。原代细胞离体时间短，在一定程度上能反映体内的生长特性。适合作药物测试、细胞分化和转化等实验研究。 细胞传代培养：原代培养细胞长到一定密度时，需进行传代培养。 √悬浮生长细胞传代：离心法