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转录组测序结题报告 1．mRNA 纯化： 抽提得到的总RNA 首先利用10U 的 DNaseI （Ambion ，美国）在37℃消 化1 小时；然后利用Micropoly(A)PuristTM mRNA purification kit （Ambion ，美 国），进行mRNA 纯化：把RNA 稀释到250μl的体积，按照Kit 的操作步骤（Cat.No: 1919）进行；最后得到的mRNA 用100μl预热的THE 缓冲液洗脱，利用NanoDrop 进行定量。 2 ．cDNA 合成： cDNA 合成是在Ng 等2005 年发表的方法基础上改进而成（文献1，图1）。 第一链cDNA 合成利用GsuI-oligo dT 作为反转录引物，10μg的mRNA 作为模板， 用1000 单位的Superscript II reverse transcriptase (Invitrogen，美国)在42℃作用1 小时 完成；随后利用NaIO4 （Sigma，美国）氧化mRNA 的5’帽子结构，并连接生物素；通 过Dynal M280 磁珠（Invitrogen，美国）筛选连接了生物素的mRNA/cDNA ，并通过碱 裂解释放第一链cDNA；然后通过DNA ligase