第五章分子生物学常用技术2.pptVIP

PCR 技术 The PCR cycle 95C step to denature the duplex DNA, An annealing step of around 55C to allow the primers to bind, 72C polymerization step. Mg2+,dNTPs are required in addition to template,primers,buffer and enzyme procedures template(DNA or RNA), primers, Taq enzyme, 10×PCR buffer, Mg++, 5mmol/L dNTPs pre-denaturation--denature completely Denaturation annealing Elongation cycles:25-30 Taq DNA聚合酶 分离:1969年，美国黄石国家公园温泉 分子量:94KDa 活性：在几种水生栖热菌中活性最高，200 000U/mg Taq DNA聚合酶 离子需要：对Mg2+、单价离子性质和浓度较 敏感。最适浓度为50mmol/L。 忠实性:没有校正单核苷酸错配功能--致命弱点。一般出错率为2×10-4核苷酸/每轮循环，利用PCR克隆、测序时尤应注意。 Taq DNA聚合酶