第五章分子生物学基本研究法.ppt

分子生物学基本研究法 5.1 重组DNA技术发展史上的重大事件 5.2 DNA操作技术 5.3 基因克隆的载体系统和工具酶 5.4 基因的分离与鉴定 5. 1 重组DNA技术发展史上的重大事件 三大成就： 第一，在20世纪40年代确定了遗传信息的携带者、即基因的分子载体是DNA而不是蛋白质，解决了遗传的物质基础问题； 第二，50年代提出了DNA分子的双螺旋结构模型和半保留复制机制,解决了基因的自我复制和世代交替问题； 5. 2 DNA操作技术 5. 2. 1核酸的分离纯化及电泳 5. 2. 2 核酸的分子杂交 5. 2. 3 细菌转化 5. 2. 4 核苷酸序列分析 5. 2. 5 基因扩增 5. 2. 1核酸的分离纯化及电泳 核酸分离提取的原则： （1）应保证核酸一级结构的完整性 （2）排除其它分子的污染 5. 2. 2 核酸的分子杂交 将带有互补的特定核苷酸序列的单链DNA或RNA混合在一起，其相应的同源区段就会退火形成双链结构。如果退火的核酸来自不同的生物有机体，所形成的双链分子就被称为杂种核酸分子。 5. 2. 3 细菌转化 所谓细菌转化，是指一种细菌菌株由于捕获了来自另一种细菌菌株的DNA而导致性状特征发生遗传改变的生命过程。提供转化DNA的菌株叫作供体菌株，接受转化DNA的细菌菌株则被称为受体菌株。 5. 2. 4 核苷酸序列分析 1、S