第四篇第6章谷氨酸发酵.ppt

* 4. 诱导酶合成 调节基因位点突变,不能编码调节蛋白； 添加底物结构类似物,使其与调节蛋白结合； 不断降低阻遏物的浓度(如连续发酵)； 生物素：凡是微生物生命活动不可缺少，而微生物自身又不能合成的微量有机物质都称为生长因子。生长因子通常是指氨基酸、嘌呤、嘧啶和B族维生素的一种，生物素又叫维生素H或辅酶R。 糖质为碳源的谷氨酸产生菌几乎都是生物素缺陷型，这些细菌本身都不能合成生物素。生物素的作用是影响代谢途径；影响细胞的渗透性。 生长因子含量的多少，与生产有着十分密切的关系。实际生产中通过添加玉米浆、麸皮水解液、糖蜜等作为生长因子的来源，来满足谷氨酸产生菌必须的生长因子。 ②??培养基? a??斜面培养基? 葡萄糖?0.1%、牛肉膏?1.0%、?蛋白胨?1.0%、氯化钠?0.5%、琼脂?2.0%、pH?7.0~7.2 121℃灭菌30min 32℃培养18-24h (传代和保藏斜面不加葡萄糖)。 b? 一级种子、二级种子及发酵培养基? 一级种子??葡萄糖?2.5%、尿素?0.6%、KH2PO4?0.1%、MgSO4.7H2O?0.04%、玉米浆?2.3~3.0ml、pH?7.0, 1000ml装200-250ml振荡，32℃ 培养12h。 二级种子??水解糖?3.0%、尿素?0.6%、玉米浆?0.5~0.6ml、K2HPO4?0.1~0.2%、MgSO4.7H2O?0.04%、pH?7.0,呈单个或八字排列。活菌数为108-109 /ml。 发酵培养基??水解糖12~14%、尿素?0.5~0.8%、玉米浆?0.6ml、MgSO4.7H2O?0.06%、KCl?0.05%、Na2HPO4??0.17%、pH?7.0? ③?发酵条件的控制? a??温度 谷氨酸发酵前期(0~12h)是菌体大量繁殖阶段，在此阶段菌体利用培养基中的营养物质来合成核酸、蛋白质等，供菌体繁殖用，而控制这些合成反应的最适温度均在30~32℃。 对数生长期：糖耗快，尿素大量分解使pH上升，氨被利用pH又迅速下降。溶氧急剧下降后维持在一定水平。菌体浓度迅速增大，菌体形态为排列整齐的八字形。不产酸。12h。 措施：及时供给菌体生长必须的氮源及调节pH，在pH7.5-8.0时流加尿素；维持温度30- 32℃ 在发酵中、后期，是谷氨酸大量积累的阶段，而催化谷氨酸合成的谷氨酸脱氢酶的最适温度在32~36℃，故发酵中、后期适当提高罐温对积累谷氨酸有利。 b??pH值 发酵液的pH影响微生物的生长和代谢途径。 发酵前期如果pH偏低，则菌体生长旺盛，长菌而不产酸；如果pH偏高，则菌体生长缓慢，发酵时间拉长。 在发酵前期将pH值控制在7.5~8.0左右较为合适，而在发酵中、后期将pH值控制在7.0~7.6左右对提高谷氨酸产量有利。 c? 通风 在谷氨酸发酵过程中，发酵前期以低通风量为宜；发酵中、后期以高通风量为宜。 实际生产上，以气体转子流量计来检查通气量，即以每分钟单位体积的通气量表示通风强度。另外发酵罐大小不同，所需搅拌转速与通风量也不同。 d?泡沫的控制 在发酵过程中由于强烈的通风和菌体代谢产生的CO2，使培养液产生大量的泡沫，不仅使氧在发酵液中的扩散受阻，影响菌体的呼吸和代谢。给发酵带来危害，必须加以消泡。 消泡方法有机械消泡(耙式、离心式、刮板式、蝶式消泡器)和化学消泡(天然油脂、聚酯类、醇类、硅酮等化学消泡剂)两种方法。 e??发酵时间 不同的谷氨酸产生菌对糖的浓度要求也不一样，其发酵时间也有所差异。 低糖(10%~12%)发酵，其发酵时间为36~38h， 中糖(14%)发酵，其发酵时间为45h。 谷氨酸发酵例子 某谷氨酸发酵，发酵过程中各种参数的变化情况如图所示。最后的发酵液中谷氨酸的浓度很低，发酵周期较长，而这段时间却有大量的葡萄糖被消耗，那么，这些被消耗的葡萄糖到哪里去了？ 出现这种情况的原因是由于发酵过程中感染了杂菌，造成了大量的葡萄糖被消耗，但是并没有产生谷氨酸, 发酵过程中发酵液的pH值控制的不合适或者是发酵液NH4＋浓度过高，使得产生的谷氨酸转变成谷氨酰胺? 显然，发酵过程中出现了异常情况，找出真正的原因。 须根据发酵过程中其他参数如溶氧浓度的变化，结合菌体形态观察等进一步分析，是由于发酵用培养基中添加的玉米浆过量，导致生物素浓度过高，这样菌体不能顺利地实现从生长型到产物积累型的转变，因而出现了这种在工业生产上称之为“只长菌，不产酸”的发酵异常现象。 五、谷氨酸提取工艺①等电点法提取操作简单，收率60％。周期长，占地面积大 等电点法提取谷氨酸原理 谷氨酸：α-型斜方晶体（好），β-型(轻麸酸)鳞片状晶体；α型结晶水分在5～10%,而β型结晶水分则高达15～20%。生产上应防止β型晶体的生成。 注意三