日本血吸虫TOR真核表达载体的构建及其在293T细胞中的表达.pdfVIP

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2017-06-19 发布于湖北
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日本血吸虫TOR真核表达载体的构建及其在293T细胞中的表达.pdf

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日本血吸虫TOR真核表达载体的构建及其在293T细胞中的表达.pdf

中国动物传染病学报2017，25(1)：66．71 ChineseJo砌alofAninlalhlfectious ·研究论文· 日本血吸虫ToR真核表达载体的构建及其在 293T细胞中的表达宰金丽，马帅，王涛，贾秉光，柴淑梅，张倩，林矫矫，傅志强 (中国农业科学院上海兽医研究所，上海200241) I酶切位点，构建真摘要：本研究扩增到日本血吸虫鼍汀OR完整的蛋白编码区并将其克隆到pxJ40．FLAG载体的砌dⅢ、劢o westem blot检测其在293T细胞中的表达情况。测序结果表明墨厂roR蛋白编码区为1245 成功。转染293T细胞48 h后，应用间接免疫荧光染色可观察到转染重组质粒的细胞有特异性绿色荧光，空质粒对照则未见。实 6 时荧光定量PcR结果显示，在转染质粒pxJ40．FLAG．TORh后彰TOR蛋白的基因已有转录，至转染24h时转录水平最高，随后开始降低。westemblot结果显示s广r0R蛋白分子量约53 可以在293 T细胞中表达，为进一步研究s广roR蛋白的生物学功能和DNA疫苗打下了基础。关键词：日本血吸虫；TOR蛋白；基因克隆；真核表达中图分类号：s852．735 文献标志码：A CoNSTRUCTIoNoFEUKARYoTICEXPRESSIoN VECToROF SC丑眄聊D!A盈A彪PD脚功ZToRANDITSEXPRESSIoNIN293TCELLS zAI Jin-li，MAShuai，WANGTao，JIA Shu-mei，ZHANG Bing—guang，CHAI Qian，LINJiao-jiao， FU Zhi-qiang 200241．Cht㈣ (S地nghmⅦtenna哆＆searchInsmu把，CAAs，shangh(1i Abstract：The were cDNA PCRandcloned DNA丘agmentencoding抽由fDsoma却on缸啪TORpmteinampli6ed仔omtemplatesby into I toconstmctthe recombinant pXJ40一FLAGtllrough既口dIII、励o euk哪oticeXpressionplasmidpXJ40一FLAG—TOR．111eplasmid wasverified and仃ansfectedimo293Tcells．The ofthe in293TceUwasdetected indirect bysequencing expressiontargetpmtein by blotand Real-time PcR．Success如l was the i㈣onuorescence，Westemquanti协tive eXpressionof卵0R