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抗冻蛋白对山羊精子冷冻保护效果的分析.pdf
2017年第鼹卷絷3朝 Scienceand t料掌技术
Technology
抗冻蛋白对山羊精子冷冻保护效果的分析
权国渡’,吴国权1,吕春荣1,梁家充1,陈必春2,邵庆勇1,洪琼花”
(1.云南省畜禽遗传资源保护和种质创新工程实验室,云南省肉羊工程技术研究中心,云南省畜牧兽医科学院,
云南昆明650224;2.鲁甸县畜牧兽医局,云南昭通657100)
摘要:本实验系统评价了抗冻蛋白Ⅲ(AFPllI)对山羊精子的冷冻保护效果。采用假阴道法采集6只云南黑山羊精液,
AFP
111)混合,经4℃平衡、液氮气相预冻后直接投
离心洗涤去除精浆后和冷冻稀释液(0、o.1、1、10、100“g/mL
入液氮保存。解冻后检测精子活力、顶体、质膜以及早期凋亡等指标。同时采用透射电镜(TEM)观察冷冻对精子超
微结构的影响。结果表明:与对照组相比,AFPHI并不能显著改善山羊解冻后精子活力、顶体完整性、质膜完整性和
低渗耐受性(PO.05)。此外,AFPIII并不能抑制解冻后精子的磷脂酰丝氨酸(Ps)外翻。电镜实验结果进一步证实,
AFPⅢ并不能有效保护冷冻精子质膜。总之,本实验证实,AFPIII并不能降低山羊精子的冷冻损伤,相反其可能加重
冷冻对精子质膜的损伤,其损伤机制尚需要进一步研究。
关键词:山羊精子;冷冻;抗冻蛋白;质膜
中图分类号:$827.3 文献标识码:A
目前,国内外对山羊精子的冷冻保存研究报 自然界中,为了降低冷冻对组织细胞的损伤,一些
道要明显少于牛、猪和绵羊。我国山羊精液冷冻保 极地鱼类可以通过合成AFP来抑制冰晶形成。抗冻
存研究始于20世纪80年代,截至目前,在大多数蛋白(AFP)并不能防止冰晶的形成,但是它们可
o在哺乳动物
的试验中,山羊冻精解冻后的活率不能稳定地超过 以修饰冰晶的大小、性状和团聚等[5-71
50%…。山羊精液在冷冻过程中要面临诸多挑战,主 精子方面,已经有研究将AFP应用于绵羊、家兔、
要包括温度变化冲击、渗透损伤、化学毒性损伤、 牛、水牛、猪、小鼠和灵长类精液的冷冻保存弘。1“,
氧化损伤、细胞凋亡、细胞内外冰晶的机械损伤等口】。 而且大部分研究均对AFP的冷冻保护效果持肯定态
另外,山羊精液中含有一种特殊的磷脂酶A。该酶 度I”911。”1。
可以将蛋黄中的卵磷脂水解为脂肪酸和溶血卯磷脂, 目前,尚未见将AFP应用于山羊精子冷冻保存
从而导致质膜通透性增加,诱发顶体反应和染色体 的研究报道,而且对于AFP对精子的冷冻保护效果
解聚,最终导致精子的死亡[3-41。 尚存在争议。本实验系统分析了AFPHI对云南黑山
羊精液的冷冻保护效果,旨在建立一套适合山羊精
液冷冻保存的技术体系。
收稿日期:2016—08—31;修回日期:2016-09-30
资助项目:国家自然科学基金31560635);云
1材料与方法
南省应用基础研究计划项目(2016FB042);云南省中青年学
术技术带头人培养计划(2014HB051);云南省科技计划项目1.1 试剂和稀释液如无特殊说明,本实验所用
(2014BB014);云南省高新技术产业发展项目计划(201404);
的化学试剂均购自Sigma公司。细胞凋亡检测试剂
家养动物种质资源平台
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