抗冻蛋白对山羊精子冷冻保护效果的分析.pdfVIP

2017年第鼹卷絷3朝 Scienceand t料掌技术 Technology 抗冻蛋白对山羊精子冷冻保护效果的分析 权国渡’，吴国权1，吕春荣1，梁家充1，陈必春2，邵庆勇1，洪琼花” (1．云南省畜禽遗传资源保护和种质创新工程实验室，云南省肉羊工程技术研究中心，云南省畜牧兽医科学院， 云南昆明650224；2．鲁甸县畜牧兽医局，云南昭通657100) 摘要：本实验系统评价了抗冻蛋白Ⅲ(AFPllI)对山羊精子的冷冻保护效果。采用假阴道法采集6只云南黑山羊精液， AFP 111)混合，经4℃平衡、液氮气相预冻后直接投 离心洗涤去除精浆后和冷冻稀释液(0、o．1、1、10、100“g／mL 入液氮保存。解冻后检测精子活力、顶体、质膜以及早期凋亡等指标。同时采用透射电镜(TEM)观察冷冻对精子超 微结构的影响。结果表明：与对照组相比，AFPHI并不能显著改善山羊解冻后精子活力、顶体完整性、质膜完整性和 低渗耐受性(PO．05)。此外，AFPIII并不能抑制解冻后精子的磷脂酰丝氨酸(Ps)外翻。电镜实验结果进一步证实， AFPⅢ并不能有效保护冷冻精子质膜。总之，本实验证实，AFPIII并不能降低山羊精子的冷冻损伤，相反其可能加重 冷冻对精子质膜的损伤，其损伤机制尚需要进一步研究。 关键词：山羊精子；冷冻；抗冻蛋白；质膜 中图分类号：$827．3 文献标识码：A 目前，国内外对山羊精子的冷冻保存研究报 自然界中，为了降低冷冻对组织细胞的损伤，一些 道要明显少于牛、猪和绵羊。我国山羊精液冷冻保 极地鱼类可以通过合成AFP来抑制冰晶形成。抗冻 存研究始于20世纪80年代，截至目前，在大多数蛋白(AFP)并不能防止冰晶的形成，但是它们可 o在哺乳动物 的试验中，山羊冻精解冻后的活率不能稳定地超过 以修饰冰晶的大小、性状和团聚等[5-71 50％…。山羊精液在冷冻过程中要面临诸多挑战，主 精子方面，已经有研究将AFP应用于绵羊、家兔、 要包括温度变化冲击、渗透损伤、化学毒性损伤、 牛、水牛、猪、小鼠和灵长类精液的冷冻保存弘。1“， 氧化损伤、细胞凋亡、细胞内外冰晶的机械损伤等口】。 而且大部分研究均对AFP的冷冻保护效果持肯定态 另外，山羊精液中含有一种特殊的磷脂酶A。该酶 度I”911。”1。 可以将蛋黄中的卵磷脂水解为脂肪酸和溶血卯磷脂， 目前，尚未见将AFP应用于山羊精子冷冻保存 从而导致质膜通透性增加，诱发顶体反应和染色体 的研究报道，而且对于AFP对精子的冷冻保护效果 解聚，最终导致精子的死亡[3-41。 尚存在争议。本实验系统分析了AFPHI对云南黑山 羊精液的冷冻保护效果，旨在建立一套适合山羊精 液冷冻保存的技术体系。 收稿日期：2016—08—31；修回日期：2016-09-30 资助项目：国家自然科学基金31560635)；云 1材料与方法 南省应用基础研究计划项目(2016FB042)；云南省中青年学 术技术带头人培养计划(2014HB051)；云南省科技计划项目1．1 试剂和稀释液如无特殊说明，本实验所用 (2014BB014)；云南省高新技术产业发展项目计划(201404)； 的化学试剂均购自Sigma公司。细胞凋亡检测试剂 家养动物种质资源平台