论著能与HBV—DNAC启动子结合成三链结构寡核苷酸设 ….pdfVIP

维普资讯 229 22．) 第 22卷第 3期 第 三 军 医 大 学 学 报 V01 22．No．3 Mar2000 220 2000年 3月 坠 竺 竺 些 f2·62 论著 巧 文章编号：1000—5404(2000)03—0220—04 能与HBV．DNAC启动子结合成三链结构的寡核苷酸的设计与筛选 光丽霞一，李为明 ，顾长生 ，袁发焕、，陈国致 ，奚 敏 。 (第三军医大学：附‘属新桥医院小儿科，重庆400037~附属 西南医院感染病科 全军传染病专科中心，重庆400038；附属新桥医院肾内科，重庆400037) 提 要 目的：筛选出能与HBV—DNAC启动子形成三链结构的高亲和力寡核苷酸 方法：以体外合成的 P 标记的HBVDNAC启动子区序列 (1734～I7541为靶序列，合成 5种有可能与该靶序列形成三链结掏的寡核 苷酸链fTFO)，同时设计对照靶序列和对照TFO，用凝胶滞留试验 酶足迹试验等方法对比分析这些TFO与靶序 列是否形成三链结构厦其结台的亲和性、特异性。结果：在37。C、pH74条件下．CT—TFO和cT—TFOp与 ”P一靶序 列DNA结台的亲和力十分微弱，其 Kd均10～mat／L；GT—YFOap和AG-TFOs与靶序列DNA结合的亲和力较 高，Kd分别为 5x107111oI／L和 2．5×10I暑otol／L；AG—TFOI 靶序列结合的亲和力最高 ，Kd为 3x10 mol／L 而且两者的结合具有序列特异性。结论：含AG或GT的TFO可与HBVC启动子区类同聚嘌呤链逆平行方向结 合成三链DNA，其中AG—TFOI与靶序列结合的亲和力最高．反应完全，可使靶双链 DNA均转变成三链DNA，经 一 定修饰后，可试用于HBV基因转录抑制实验。 删 关键词 墨兰壁叁壁；三焦p 墨量黄瞳；宦旺 中图法分类号 R373．2I；R394 g 文献标识码 Designandscreeningofoligo·nucleotidesformingtriplexthroughbinding withhomopurineinHBV-DNA corepromoter GUANGLi—xia，L】W ei—rain，GU Chang-hal，YUAN Fa-huan．CHEN Guo—zhi，XIMin {DepaamentofPediatrics，Xinqiao Hospital，ThirdMilitaryMedicalUniversity，Chongqing400037．China) Abstract 0biective：TofindoligodeoxyribonucleotidesthatcanbindwithHBVcodepromot— ertargetsitewithhighaffinityandspecificity． Methods：Similar homopurine domain (1734～ J7541inHBVcompromoterwaschosenasthetargetsequence．Severalcorrespondingoligodeoxyribonu· cleotidesweresynthesized．Thebindingaffinityandspecificityof