cDNA第二链合成试剂盒.PDF

cDNA第二链合成试剂盒 产品编号 产品名称 包装 D7172 cDNA 第二链合成试剂盒 10 次 产品简介：  cDNA第二链合成试剂盒，Second Strand cDNA Synthesis Kit是一种在合成了cDNA第一链的基础上去除RNA-DNA杂合链中 的RNA链并合成cDNA第二链，最终形成双链cDNA 的试剂盒。本试剂盒包含了进行cDNA第二链合成所需的各种试剂。  本试剂盒采用RNase H使RNA-DNA杂合链中的RNA产生切口，此时DNA Polymerase I可以通过切口平移(nick translation)反 应催化形成cDNA第二链。  使用本试剂盒合成的双链cDNA，可以直接用于后续的常规PCR 、real-time PCR 、cDNA文库的构建等。  本试剂盒用于体积为20微升的cDNA第一链合成反应的后续反应时，足够进行20个cDNA第二链样品的合成。 包装清单： 产品编号 产品名称 包装 D7172-1 RNase H (1U/μl) 10μl D7172-2 DNA Polymerase I (10U/μl) 30μl D7172-3 Reaction Buffer (10X) 100μl － 说明书 1份 保存条件： -20 ℃保存。 注意事项：  进行第二链合成时，dNTP 比较适当的最终浓度约为0.2mM 。如果最终浓度过低，在反应体系中需要适当补充dNTP 。  如果希望获得平末端的双链cDNA，可以用T4 DNA Polymerase (D7051)或DNA末端平滑试剂盒(D7012)处理。  酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20 ℃保存。  本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。  为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 使用说明： 1. 用反转录酶，例如BeyoRTTM II M-MLV反转录酶(RNase H-) (D7160/D7161/D7162)或BeyoRTTM II cDNA第一链合成试剂盒 (RNase H-) (D7167/D7168)合成cDNA第一条链，70℃孵育10分钟终止反应。 2. 在冰浴上向已经合成第一条链的20μl反应体系中依次加入如下试剂： Reaction Buffer (10X) 8µl 无核酸酶去离子水 68µl RNase H (1U/μl) 1μl DNA Polymerase I (10U/μl) 3μl 3. 按上述体系配好之后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。 4. 15℃孵育2小时。(注意：反应温度不能超过15℃) 5. 加入5μl 0.5M EDTA(pH8.0)混匀，以终止反应。 6. 后续可以使用酚氯仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化合成的双链cDNA ，也可以使用适当的DNA纯化试剂盒进行纯化。DNA纯 化试剂盒(D0033)可以向碧云天订购。 相关产品： 产品编号 产品名称 包装 TM D7153 BeyoRT M-MLV反转录酶 2000U