4造血调控2011课件.pptVIP

第四节 造血干／祖细胞体外培养技术 体内造血干／祖细胞在一个极复杂的造血微环境中增殖、分化生成血液细胞。 体外造血祖细胞培养就是在体外模拟体内的生理环境，将从机体中分离出的造血祖细胞进行培养，使之生存、增殖分化。 一、造血干／祖细胞体外培养的基本条件 （一）细胞培养室条件 （二）培养的支持物 （三）营养液 （四）细胞因子 （五）血清 二、造血干／祖细胞体外培养方法 （一）造血祖细胞集落培养： （1）分离培养细胞，制成单个核细胞悬液。 （2）配制培养体系：按比例将培养液、细胞、血清、细 胞因子加入到培养体系，混匀。 （3）将配制的培养体系在37℃水浴中保温10min。 （4）将琼脂等支持物煮沸融化（甲基纤维素不需加热）。 （5）待支持物降至40℃左右，加入培养体系并混匀。 （6）将混匀后的培养体系加入培养皿或培养板孔内， 一般平行做3份。 （7）于5% CO2、饱和湿度及37℃温箱内孵育。BFU-E 需14天，CFU-E需7天。 （8）观察结果。 红细胞爆式集落形成单位 （BFU-E） 红细胞的祖细胞体外培养 红细胞集落形成单位 (CFU-E) （二）红系祖细胞诱导分化的液体培养： Medium FBS EPO Stem cell factor IL3 三、造血祖细胞培养的主要应用： 1）检测造血祖细胞在骨髓、外周血和脐血中的数量； 2）研究体外造血祖细胞类型、特性及生理意义； 3）利用人工培养条件易于严格控制的特点，研究造 血调节； 4）用于造血系统疾病发生机制，诊断、预后判断、 疗效观察及治疗药物的选择等方面的研究。 造血干细胞的发育调控 授课教师：刘 静 jingliucsu@ 生物科学与技术学院分子生物学研究中心 研究方向1：造血发育调控 研究方向2：白血病治疗的分子机制研究 造血（hematopoiesis） 造血干细胞(hematopoietic stem cell)分化为早期祖细胞(primitive progenitor cell) ，经增殖分化成为晚期祖细胞(late progenitor cell)，再分化为具有特异形态的、骨髓中不同系别前体细胞(precursor cell)，最后分化成为各类具有生理功能的血细胞的整个过程称为“造血” 。 造血不包括成熟血细胞在体内储存、释放、分配和凋亡的过程。 第一节 造血器官 人体的造血器官是生成血液的器官。 起源于中胚叶，主要包括骨髓、胸腺、淋巴结、 肝脏和脾等。 造血过程分为胚胎期造血和出生后造血。 一、胚胎期造血器官　 人类的血液细胞首先在卵黄囊中形成，肝、脾、胸腺和骨髓均参与造血 根据发育过程中造血中心的转移，胚胎期造血分为三个时期： 卵黄囊造血期 、肝造血期 、骨髓造血期 胚胎期造血的三个时期不能截然分开，此消彼长，互为交错。 二、出生后造血 出生后造血主要靠骨髓。 在正常情况下骨髓是唯一能产生红细胞、粒细胞和血小板的场所，也生成淋巴细胞和单核细胞。 脾和淋巴结为终生制造淋巴细胞的器官。 一、造血细胞的生长发育 是一个连续不断的复杂过程，造血器官内的各种造血细胞在造血微环境中通过细胞与细胞之间相互作用，在各种细胞因子的诱导下，按一定的规律发育成为各种成熟的血细胞，然后释放入血循环中。 第二节 造血干/祖细胞的生长发育特性 （一）基本过程 造血细胞的生长发育包括增殖、分化、成熟和释放四个方面。 造血细胞的增殖（proliferation） 是指血细胞通过分裂而使其数量增加的过程。有丝分裂是造血细胞的主要增殖方式。 造血细胞的分化（differentiation） 细胞发育过程中失去某些潜能而获得新功能的过程，即由多潜能转变为单潜能的过程。 分裂后的细胞在形态和功能上产生新的特征，分化过程是不可逆的。 造血细胞的成熟（maturation） 造血干细胞定向分化，从原始经幼稚到成熟细胞的发育过程。血细胞越成熟其形态越易辨认，功能也日趋完善。成熟的血细胞在骨髓内通过“髓血屏障”释放入血循环中。 （二）造血细胞生长发育阶段 根据造血细胞的功能和形态特征，造血细胞生长发育阶段可分为： 造血干细胞 造血祖细胞 原始及幼稚细胞 造血干细胞阶段 造血祖细