第七章电子显微镜免疫组织化学技术.pptVIP

第七章 免疫电镜 一 电镜免疫组织化学技术概述 特异性抗体用电子致密物质，如铁蛋白、胶体金等标记后，使之与组织超薄切片中的抗原结合，在电镜下观察到标记物所在位置，即为抗原抗体反应的部位。 （一）组织固定与取材 原则： 既要保存良好的细胞超微结构，又要注意保持组织的抗原性。 固定： 固定剂的要求： ①不损害细胞内抗原的活性； ②固定速度快、效果好； ③分子量小，易于渗透； ④固定后,不引起交联，造成空间的阻碍，影响标记抗体进入抗原位。 影响固定的因素有： ① 固定剂的种类； ② 固定剂的浓度，浓度过大，对抗原的活性有影响，浓度过小，固定效果差； ③ 固定剂的pH； ④ 固定剂的温度,一般采用2℃～4℃冷固定；这样能降低细胞自溶作用和水分抽提； ⑤ 固定时间与温度有关，温度高，固定快，也与缓冲系的离子强度有关，离子强度大，渗透压大，穿透力强，固定要快。不同的固定剂，或同一固定剂的不同浓度所需的固定时间也不一致； ⑥ 与被固定的细胞类型有关。 选用固定剂不宜过强。常采用灌注固定法。 多聚甲醛—戊二醛混合液 过碘酸—赖氨酸一多聚甲醛液(PLP液)： 对含糖类丰富的组织固定效果特佳。 （使用前必须用已知效价的抗原做一系列预实验。如固定剂的种类浓度、温度、pH及固定时间等。然后做出预处理的效价，作为失活