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第12章 重组DNA技术 本章内容提要 1) 重组DNA与限制性内切酶 2) 大肠杆菌质粒克隆载体的结构 3) 如何构建基因文库 4) 分子杂交的原理与程序 5) 如何从基因文库中筛选基因 什么是重组DNA? 分子刀-DNA限制性内切酶 限制性内切酶是一类在原核生物中发现的可以识别 特定的DNA碱基顺序并将其切开的酶. 限制性核酸内切酶的特点 1) 限制性核酸内切酶仅在原核生物中发现. 2) 限制性核酸内切酶识别的碱基顺序长度不等, 可从4 碱基对到数十碱基对. 大多数常用的限制酶识别 的碱基对长度为4-6个碱基对. 3) 限制性核酸内切酶切割DNA的方式可以是5’突出单 链或3’突出单链, 也可以是平端酶切. 4) 大多数II型限制性核酸内切酶识别的碱基顺序都有 回文对称的特点, 即旋转1800, 识别顺序重叠. 5) 细菌中的限制核酸内切酶可以将外源的DNA切割,但 不酶切自身的DNA. 因为细菌基因组DNA可以甲基化, 使限制酶不能识别而得以保护. 发现限制性内切酶 1) 1950年代科學家發現了大腸桿菌K具有某種機制可以 限制λ噬菌體的感染能力. 2) 1962年瑞士的科學家Werner Arber等人證明了大腸桿 菌K可以產生一種酶，可以阻止λ噬菌體的感染能力