2分离以尿素为氮源的微生物及计数.pptVIP

微生物种类及其代谢 同化作用： 生物体从外界获取营养物质，转化为自身组成物质的过程。 异化作用： 生物体自身物质分解，放出能量，排出废物的过程。 微生物种类及其代谢 同化作用类型： 自养型：直接利用环境中的无机物合成自身所需要的有机物。如进行光合作用的绿色植物、蓝细菌。 硝化细菌——化能合成作用：利用化学反应释放的化学能，将无机物合成自身的有机物。 异养型：直接利用环境中的有机物合成自身所需要的有机物。如各种动物、大多数细菌等。 微生物种类及其代谢 异化作用类型： 有氧呼吸型（需氧型） C6H12O6+6O2+6H2O→6CO2+12H2O+能量 无氧呼吸型（厌氧型） C6H12O6 → 2C2H5OH+2CO2+能量 C6H12O6 → 2C3H6O3+能量 微生物种类及其代谢 微生物包括哪些类型？ 构成微生物的细胞类型有哪些？ 不同微生物代谢类型有哪些？ 同化作用+异化作用=代谢类型 微生物种类及其代谢 微生物种类及其代谢 微生物种类及其代谢 分离以尿素为氮源的微生物并计数 实验目的 1．使用专一的培养基（含有尿素）分离专一的细菌（有脲酶的细菌）　　　 2．使用指示剂颜色的变化检知酶（脲酶）所催化的反应 3．说明测定细菌数量的原理与方法 分离以尿素为氮源的微生物并计数 实验原理 （1）琼脂和琼脂糖 琼脂是一种未被纯化的混合物，主要成分为琼脂糖和琼脂果胶，还含有少量的含氮化合物，及其它有机杂质和不溶性杂质。琼脂作为微生物固体培养基不可缺少的组成成分，其优点是： ①其主要成分不能被微生物利用； ②可使培养基固化； ③不影响培养基中其他营养物质被细菌吸收。 分离以尿素为氮源的微生物并计数 实验原理 实验是用琼脂糖代替琼脂作为微生物培养基的固化剂，其目的是：尽可能使培养基中只含尿素一种含氮化合物，以防止琼脂中的含氮化合物被以尿素为氮源的细菌利用，有利于对这类细菌的筛选。 分离以尿素为氮源的微生物并计数 （2）酸碱指示剂（鉴定） 尿素在被脲酶催化分解前是中性的，由于尿素在脲酶的催化下分解产生了NH3，溶液会呈碱性。 本实验中，酚红作为酸碱指示剂被添加到了培养基中，其变色范围是pH6.4～8.2，在酸性情况下呈黄色，碱性情况下呈红色， 分离以尿素为氮源的微生物并计数 实验原理 以尿素为氮源的微生物培养一段时间后，由于细菌产生的脲酶向周围扩散，将培养基中尿素的分解，产生的NH3使培养基的pH由原来的中性变为碱性，于是培养基中的酚红由黄色变成红色，圆形红色区域愈大，表明这种菌利用尿素的能力愈强。 分离以尿素为氮源的微生物并计数 关键技术——“涂布分离法” 涂布分离时，需要先将菌液稀释，一般稀释到10-5～10-7之间，然后取0.1mL的不同稀释度的菌液，放在培养皿的固体培养基上，再用消毒后的玻璃刮刀把这些菌液涂布在培养基平面，在适当的稀释度下，可培养产生相互分开单个的菌落。通常每个培养皿中有20个以内的单菌落为最合适。 将每个菌落分别接种在斜面上扩大培养后，再做功能性实验。 分离以尿素为氮源的微生物并计数 基本操作步骤 （1）制备空白平板：取2个三角瓶，分别装入已灭菌的全营养LB固体培养基和尿素固体培养基，放在超净工作台上，冷却至60 ℃左右时，在酒精灯旁把上述两种培养基分别倒至2个培养皿中（做两组，共4个空白平板），轻轻摇匀，平放至凝固。 分离以尿素为氮源的微生物并计数 分离以尿素为氮源的微生物并计数 （3）涂布法分离细菌：在无菌条件下，分别取0.1 mL的稀释度为10-4和10-5的土壤稀释液（细菌悬液） ，分别加到装有全营养LB培养基和尿素培养基的培养皿（空白平板）中；再将保存在70%酒精中的玻璃刮刀放在酒精灯火焰上，待刮刀上火焰熄灭后，在酒精灯火焰旁打开培养皿，将前面已加入的土壤稀释液（细菌悬液）均匀涂布到整个平面上。 分离以尿素为氮源的微生物并计数 （4）将培养皿倒置摆放在37℃恒温箱中培养24～48h，观察菌落数 。 观察实验结果 计数：统计培养基上菌落数 分离以尿素为氮源的微生物并计数 培养基上菌落数统计比较 1 与稀释度为10-5相比，培养基中的菌落数在 稀释度为10-4时 2在相同的稀释度的情况下，尿素培养基中的菌落数 于LB培养基中的菌落数，其原因是 。 微生物的培养 微生物计数方法 活菌计数——样品稀释度足够高时，培养基表面只生长1个菌落（来源于样品稀释液中的1个活菌）。根据平板上菌落数，推测样品中大约含有多