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厦门太阳马生物工程有限公司 梭华- Sofast 转染寡核苷酸操作规程 梭华-Sofast 转染寡核苷酸操作规程 Sunma 1. 介绍 梭华-Sofast 是新一代的阳离子聚合物基因转染试剂，梭华-Sofast 具有高效率转染所必备 特征，梭华- Sofast 能与带阴离子的反义寡核苷酸形成稳定的复合物，形成的复合物通过内吞等 作用进入细胞内，并释放出反义寡核苷酸，后者选择性抑制或调节基因表达。梭华- Sofast 的细 胞毒性很低，而且与其它转染试剂相比，梭华- Sofast 很稳定，不 血清清除，使得基因转染的 操作简便易行，重复性好。 2. 储存 5.0mg/ml 。梭华- Sofast 在室温下运输，试剂到达时请即存放于+4℃处，在+4 ℃可存放一年。 使用前请轻轻摇匀。 3. 转染操作规程(贴壁细胞的转染) 3.1 细胞接种 为了获得最好的转染效率，细胞密度应该50-80%，这因细胞株的不同而变化，对最常用的 细胞株建议细胞密度60-70% 。对于24 孔板，最理想条件是在转染前18-24 小时，每孔接种8 104 -2.0 105 个细胞。然而，在多数情况下，如果在细胞贴壁后(接种几小时后) 即进行转染， 也可以得到相近的结果。对细胞毒性不敏感的细胞株可在细胞接种后立即进行转染。表1 列举 了不同细胞培养装置的推荐细胞数量。 表1. 不同细胞培养装置的推荐细胞数量 细胞培养装置 每装置面积 细胞数量 细胞培养液总体积 2 (mm /孔或皿) l/孔或皿 96 孔板 50 4 1.5-5.010 100l 48 孔板 100 4 5 3.010 -1.010 200l 24 孔板 200 4 5 8.010 -2.010 500l 12 孔板 401 5 1.0 ml 1.6-4.010 6 孔板 962 5 2.0 ml 3.0-8.010 35mm 培养皿 962 5 2.0 ml 3.0-8.010 60mm 培养皿 2827 6 6.0 ml 1.0-2.510 100mm 培养 7854 6 10.0 ml 2.5-6.410 皿 3.2 梭华- Sofast /寡核苷酸复合物的制备( 以24 孔板转染为例) 3.2.1 0.5µg 寡核苷酸质粒稀释于30