4土壤中分解尿素的细菌的分离与计数.ppt

课题1、微生物的实验室培养 1、培养基的概念、基本成分包括哪些？（光能自养微生物的碳源、能源？化能自养微生物的碳源、能源？异养微生物的碳源、能源？固氮菌的氮源？硝化细菌的碳源、能源、氮源分别是？）特殊营养及pH、氧气的需求：（培养乳酸杆菌时需在培养基中添加什么？培养霉菌时的PH是什么？培养细菌时的PH是什么？培养厌氧微生物的条件是什么？） 2、培养基的种类？（如何分离真菌、金黄色葡萄球菌、固氮菌、自养型微生物、光合细菌、假单胞杆菌；如何鉴定大肠杆菌、分离尿素的细菌？） 3、无菌技术的关键和操作？消毒和灭菌的区别（条件、结果）和方法（每种方法的使用条件和适用范围）？ ①接种环、接种针、试管口；②玻璃器皿、金属用具；③培养基、无菌水；④表面灭菌和空气灭菌；⑤干热灭菌箱、高压蒸汽锅灭菌后打开的条件？ 4、制作牛肉膏蛋白胨固体培养基方法步骤：（如何称量？如何溶化？琼脂如何熔化？注意事项是什么？如何包扎？培养基、培养皿的灭菌的方法？什么时候调节PH） 5、倒平板的温度是多少？场所在哪？用什么办法来估计培养基的温度？为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？为什么将平板倒置？ 6、微生物的接种方法有？接种的目的是 ？什么是菌落？ 7、平板划线的目的：模拟平板划线操作：（①第一步灼烧接种环的目的：②灼烧接种环之后冷却的目的：③每次划线之前灼烧接种环的目的：④第二次及其后的划线总是从上次划线的末端开始划线的原因：⑤划线结束后灼烧接种环的目的：） 8.涂布平板操作的步骤（如何稀释？涂布的工具是什么？如何灭菌？如何使菌液均匀地涂布在培养基表面？） 9、如何培养微生物：（①为什么要将一个未接种的培养基进行培养？②未接种的培养基表面是否有菌落生长？如果有菌落生长说明什么？）10、菌种的保存方法有？ 课题背景 1、植物能直接利用尿素吗？ 2、土壤中的尿素如何被植物利用？ 3、如何设计实验分离出土壤中能分离尿素的细菌？如何对其进行计数？ 不能。植物是自养生物，利用无机氮源，尿素是有机物只有当分解成无机氨后才能被植物利用 细菌脲酶 土壤中某些细菌能合成脲酶，将尿素分解为NH3 CO(NH2)2 + H2O CO2 +2NH3 课题2　 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 思考：PCR技术要求使用耐高温的DNA聚合酶，这种酶要能忍受93 ℃左右的高温。如果请你来寻找这种耐高温的酶，你会去哪里寻找？(　　) A．土壤中　　 B．海水中　　 C．热泉中　　 D．冷库中 C 如何寻找耐高温的酶？ —寻找高温环境； 原理：热泉70-80℃的高温条件淘汰了绝大多数的微生物，使得耐热的Taq细菌脱颖而出。选出耐高温细菌后，从耐高温菌种中提取耐高温酶。 研究思路 （一）菌株的筛选 1、自然界中目的菌株的筛选 2、实验室中目的菌株的筛选 在寻找目的菌株时，根据它对生存环境的要求到相应的环境中去寻找 选择培养基 人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、 温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。 KH2PO4 1.4g NaHPO4 2.1g MgSO4 H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g 琼脂 15.0g 从物理性质上看此培养基属于哪类？ 在该培养基中，哪些作为碳源、氮源？ 根据用途看此培养基属于哪类？ 作用原理是？ 碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素 只有能以尿素作为氮源微生物（产生脲酶）才能在该培养基上生长。 3、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基： 固体培养基 选择培养基 1、显微镜直接计数法（菌株）： 利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。由于此法计得的是活菌和死菌的总和，又称总菌计数法。 ㈡.统计菌落的数目：（方法？） 不能区分死菌与活菌； 不适于对运动的细菌进行计数； 个体小的细菌在显微镜下难以观察 缺点 2.间接计数法（活菌计数法） 方法： 常用稀释涂布平板法统计活菌的数目 原理： ?当样品的 时，培养基表面生长 的一个菌落来源于样品稀释液中的 。 为了保证结果准确，一般选择菌落数在 统计 ?通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品 中大约含有多少的活菌。 要求： 30～300 个菌落的平板 稀释度足够高 一个活菌 例：两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。从对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果。 1、甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230。