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拟南芥抗盐突变体筛选中盐浓度的确定 摘要将拟南芥种子播种于1/2 MS培养基上,竖直培养,待根生长至1.5~2.0 cm时,转入含有不同NaCl浓度的1/2 MS培养基上,倒置培养,观察各个盐浓度下根的生长情况。试验结果表明,在170、180、190 mmoL/L的NaCl浓度下,拟南芥的根生长虽然都表现出一定的延迟,但最终还能够生长;而在200 mmoL/L时,根生长完全受到抑制,最终白化死亡,由此确定其生长的临界盐浓度为200 mmoL/L。 　　关键词拟南芥;突变体筛选;盐浓度 　　中图分类号Q945.78文献标识码A文章编号 1007-5739(2010)23-0025-01 　　 　　模式植物拟南芥(Arabidopsis thaliana)为十字花科拟南芥属一年生草本植物,它具有基因组小、个体小、生长周期短、种子繁殖系数高、严格的自花闭花授粉、易于遗传转化、便于栽培管理等特点。拟南芥是典型的甜土植物,本身并不抗盐,但是大量研究表明它包含了大多数的抗盐基因,拟南芥基因组的全序列物理图谱已于2000年12月公布[1](The Arabidoposis Genome Initiative 2000),这是第一个被全部测序的植物。目前在拟南芥中,只有少数基因的功能被确定[2],对拟南芥抗盐突变体的研究,有助于基因功能的探索,而前期工作突变体筛选条件的确定尤为重要[3-4],是后续试验成功的关键。 　　1材料与方法 　　1.1试验材料 　　野生型拟南芥种子;基本培养基:1/2 MS培养基;含盐培养基:分别含有170、180、190、200 mmoL/L NaCl浓度的1/2 MS培养基。 　　1.2试验方法 　　1.2.1播种与培养。将经过10 h氯气熏蒸灭菌的野生型拟南芥种子水平排列播种于基本培养基上,置于4 ℃冰箱放置2 d,以确保种子发芽时间基本一致。2 d后,从冰箱中移出,置于22~23 组培室中竖直培养,每天给予14 h充足光照和10 h黑暗。 　　1.2.2转移与培养。待根生长至1.5~2.0 cm时,挑选根长度基本相同且较为健壮的幼苗分别移入含有170、180、190、200 mmoL/L的NaCl培养基,并在培养皿上标记好根生长的初始位置,倒立竖直培养,培养条件与前相同。 　　1.3观察与记录 　　每天观察不同盐浓度下根的生长情况、弯曲程度以及幼苗的生理状态,每隔一定时间在培养皿上对根的生长位置进行标记,并做好记录。 　　2结果与分析 　　将幼苗移入含有不同盐浓度的培养基后,都表现出一定程度的生长抑制,可能由于不同盐浓度对根的生长都造成了一定的延迟。经过生长延迟后,幼苗适应了相应盐浓度,在部分浓度下根出现了弯曲生长(图1):在170 mmoL/L浓度下,根经过短暂的迟延开始弯曲生长,且弯曲的程度较大,生长较快。在180 mmoL/L浓度下,根的生长状况与170 mmoL/L浓度下几乎相同,生长较快,弯曲程度较大。在190 mmoL/L浓度下,根的生长受到了短暂的抑制,但随后出现弯曲生长。在200 mmoL/L浓度下,根的生长完全受到了抑制,没有出现弯曲现象,且很快萎蔫,白化死亡。 3结论与讨论 　　试验结果表明,在170、180、190 mmoL/L的NaCl浓度下,根的生长虽然都表现出一定的延迟,生长速度不太一致,但最终还是能够生长,出现了一定程度的弯曲,而在200 mmoL/L的NaCl浓度下,根的生长完全受到了抑制,没有出现任何程度的弯曲,经过一定时间后萎蔫,因此确定200 mmoL/L NaCl为筛选浓度。该盐浓度经过多次反复验证,可作为拟南芥抗盐突变体的筛选条件[5-6]。 中国论文联盟编辑整理。 　　4参考文献 　　[1] AGI.Analysis of the genome sequence of the flowering plant Arabidopsis thaliana[J].Nature,2000,408(6814):796-815. 　　[2] BOUCHE N,BOUCHEZ D.Arabidopsis gene knockout:phenotypes wanted[J].Current Opinion in Plant Biology,2001,4(2):111-117. 　　[3] MEiNKE D W,CHERRY J M,DEAN C,et al.Arabidopsis thaliana:a model plant for genome analysis[J].Science,1998(5389):662,679-682. 　　[4] 赵淑清.一种筛选拟南芥突变体的有效方法[J].遗传,2001,23(3):260-261. 　　[