色谱-基本原理浅析.pptVIP

4）若要求R达到1.5，则柱长至少应为多少 5）使用上述较长的柱进行分析时，其分析时间为多长？ 6）不增加柱长，要求在原来的分析时间内R达到1.5，该柱的塔板高度应为多少？ 当色谱柱长度一定时，塔板数 n↑, 塔板高度 H↓, 被测组分在柱内被分配的次数越多，柱效能则越高，所得色谱峰越窄。 不同物质在同一色谱柱上的分配系数不同，用有效塔板数和有效塔板高度作为衡量柱效能的指标时，应指明测定物质。 柱效不能表示被分离组分的实际分离效果，当两组分的分配系数 K 相同时，无论该色谱柱的塔板数多大，都无法分离。 塔板理论无法指出影响柱效的因素及提高柱效的途径。 3.塔板理论的特点： 三、速率理论 (一)Van Deemter 方程式 塔板理论是一个半经验性的理论。它定性的给出了板高的概念，但不能指出影响板高的因素。速率理论就是在塔板理论的基础上，给出了影响塔板高度的因素： u 为流动相线速度； A，B，C为常数，其中 A—分别表示涡流扩散系数； B—分子扩散系数； C—传质阻力系数（包括液相和固相传质阻力系数）。 该式从动力学角度很好地解释了影响板高（柱效）的各种因素。任何减少方程右边三项数值的方法，都可降低H，从而提高柱效。 由于填充柱固定相颗粒装填不均匀，颗粒直径大小不一，流动相在柱中向前移动时就会有不同的路径，从而使组分在迁移过程中随流动相不断改变方向，形成紊乱的“涡流”。 同一组分运行路线长短不同 流出时间不同 峰形展宽 1.涡流扩散项 (A) 展宽程度以A表示：A=2?dp 固定相颗粒的几何形状和填充均匀性 dp—填充物平均直径；?—填充不规则因子 使用细粒的固定相并填充均匀可减小A，提高柱效。对于空心毛细管柱，无涡流扩散，即A=0。 纵向分子扩散是由于浓度梯度引起的。 样品被注入色谱柱时，它呈“塞子”状分布。随着流动相的推进， “塞子”因浓度梯度而向前后自发地扩散，使谱峰展宽。 B=2?D ? —称为弯曲因子，它表示固定相几何形状对自由分子扩散的阻碍情况； 硅藻土载体? 0.5-0.7 毛细管? =1 2.分子扩散项 (B) D—组分在流动相中的扩散系数。Dg或Dm表示； 气相色谱 分子量大的组分，Dg小 Dg 随柱温升高而增加，随柱压降低而减小 流动相分子量大，Dg 小， u 增加，组分停留时间短，纵向扩散小 液相色谱 Dm 较小，B 项可忽略 B=2?D 因传质阻力的存在，使分配不能“瞬间”达至平衡，因此产生峰形展宽。气相色谱以气体为流动相，液相色谱以液体为流动相，二者传质过程不完全相同。 1）气液色谱：传质阻力项C包括气相传质阻力系数Cg和液相传质阻力系数Cl。 3.传质阻力相(C) 流动相 固液界面 固定液 组分分子 Cl Cg 减小填充颗粒直径dp； 采用分子量小的流动相，增加Dg，降低C(快速分析) 减小液膜厚度df，Cl下降。但此时k又减小。因此，当保持固定液含量不变时，可通过增加固定液载体的比表面来降低df。但比表面过大又会因吸附过强使峰拖尾。 增加柱温，可增加Dl，但k值也减小，为保持合适Cl值，应控制柱温。 2）液液色谱：传质阻力项C 包括流动相传质阻力系数Cm 和固定相传质阻力系数 Cs。 ?sm 流动相传质阻力包括两方面：流动相中的传质阻力Cm、滞留的流动相传质阻力Cs。分别与填充物大小dp、扩散系数(Dm)、微孔大小及其数量等有关。 降低流动相传质阻力的方法有：细颗粒固定相、增加组分在固定相和流动相中的扩散系数D、适当降低线速度、短柱。 固定相传质阻力与液膜厚度df、保留因子 k 和扩散系数Ds等有关。 降低固定相传质阻力的方法有：与气液色谱中液相传质阻力的表述相同。 4.流速u H = A + B/u + Cu 当u一定时，仅在A、B、C 较小时，H 较小，柱效较高；反之则柱效较低，色谱峰将展宽。 以u对H作图，可得H-u曲线（如图），从该曲线得到： 板高，H(cm) Hmin A+B/u+Cu Cmu Csu A B/u H = A + B/u + Cu 涡流扩散项A与流速u无关； 低流速区(u小)，B/u大，分子扩散项占主导，此时选择分子量大的气体如N2和Ar为载气，可减小扩散，提高柱效； 高流速区(u大)，Cu大，传质阻力项占主导， 此时选择分子量小的气体如H2和He为载气， 可增加扩散系数，提高柱效； 在LC中，较低流速可获得较大的柱效。 5.固定相颗粒大小对板高的影响 实验表明，颗粒越细，板高越小，受线速影响越小。即，在HPLC分析中采用细粒作固定相的理论根据！ 但颗粒细导致柱流速慢，当采用高压技术，才能实现HPLC的分析要求。 板高, H(cm)