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第十一章同工酶与气体酶学 第一节 同工酶的基础知识 第二节 同工酶的应用 第三节 固氮酶的作用 第四节 甲烷加氧酶的作用 第五节 氧化CO的酶 二．分类 单基因决定的同工酶 多基因决定的同工酶 复等位基因基因决定的同工酶 修饰同工酶 三．同工酶的结构基础 同工酶的一级结构的差异 构象变化造成同工酶的差异 例：苹果酸脱氢酶，在生物提中有两中类型的苹果酸脱氢酶，分别位于线粒体（倾向与苹果酸氧化）和细胞质（倾向于草酰乙酸还原）。由于编码他们的基因不同，其氨基酸组成和电泳的行为也有差别，特别是他们的动力学性态更有不同。 四．同工酶的常用分离和测定方法 （一） 方法 1 电泳 2 层析 3 热稳定性 4 动力学 5 免疫法 （二） 方法使用注意点 1．严格控制可能影响实验的条件，重复实验。 2．尽量消除由环境造成的差异。 3．增大实验的样本数量及样本随机性，使之具有代表性。 4．实验条件标准化，减少人为操作造成的误差 5．基本酶谱与分析方法的标准化。 6．选择尽可能多的酶进行分析。 同工酶的应用 一 植物系统学研究中的应用 （一）原理：同工酶在不同的物种、同一物种的不同时期、同一时期的不同器官、同一器官的不同组织中都具有特异性，既是生理指标，又是可靠的遗传物质表达产物。 （二）应用领域 1 ．同工酶在栽培粮食作物（水稻、玉米、小麦、荞麦）起源和演化中的作用 2．同工酶在中药材起源和演化中的作用 3．同工酶在果树起源和演化中的作用 4．同工酶技术在十字花科作物育种上的应用 1、下列关于同工酶的概念的叙述那一项是正确的 A、是结构相同而存在部位不同的一组酶 B、是催化相同化学反应而酶的一级结构和理化性质不同的一组酶 C、是催化反应及性质都相似而发生不同的一组酶 D、是催化相同反应的所有酶 E、以上都不是 第二节 固氮酶的作用 一．固氮酶 固氮酶是一种能够将分子氮还原成氨的酶。固氮酶是由两种蛋白质组成的：一种含有铁，叫做铁蛋白，另一种含铁和钼，称为钼铁蛋白。只有钼铁蛋白和铁蛋白同时存在，固氮酶才具有固氮的作用(因为这两种物质作为电子载体能够起到传递电子的作用）。 生物固氮原理简介 ： 生物固氮是固氮微生物特有的一种生理功能，这种功能是在固氮酶的催化作用下进行的。 固氮微生物需氧，而固氮必须是在严格的厌氧微环境中进行。组成固氮酶的两种蛋白质，钼铁蛋白和铁蛋白，对氧极端敏感，一旦遇氧就很快导致固氮酶的失活，而多数的固氮菌都是好氧菌，它们要利用氧气进行呼吸和产生能量。 固氮菌在进化过程中，发展出多种机制来解决既需氧又防止氧对固氮酶的操作损伤的矛盾。其中之一是固氮菌以较强的呼吸作用迅速地将周围互不干涉中的氧消耗掉，使细胞周围处于低氧状态，保护固氮酶不受损伤。 二．固氮酶的研究热点 生物固氮研究正在分子和原子水平上开展 1．固氮基因表达的氨阻遏和氧敏感机制 2．共生结瘤固氮中植物与微生物相互关系的基因表达和调控 3．根瘤菌结瘤因子的结构和生物合成 4．根瘤菌及其宿主植物的基因组学转录组学和蛋白质组学 5．固氮酶的结构和功能及其化学模拟 三、固氮酶的应用 （1） 农业中：固氮肥料的研究 （2） 生物制氢技术中的应用 光合生物产氢 能够产氢的光合生物包括光合细菌和藻类。 光合细菌属于原核生物，催化光合细菌产氢的酶主要是固氮酶。 第三节 甲烷加氧酶的作用 一．概念 甲烷单加氧酶是甲烷利用细菌(methanotrophic bacteria)代谢过程中的重要酶系，在细菌细胞内直接利用分子氧作为底物催化甲烷氧化成甲醇。 二．酶的性质 1．甲烷利用细菌的分类和表现形态 可根据所利用碳源和能源不同将甲烷利用细菌分成： 专性甲烷利用细菌 兼性甲烷利用细菌 拟甲烷利用细菌 2．酶的组成 组分A为245KD左右的羟基化酶； 组分B为15KD左右的调节蛋白； 组分C为分子量为40KD左右的还原酶 3．活性中心 羟基化酶是一个由三种亚基组成的二聚体蛋白 什么是MMOB?调节蛋白 第四节 氧化CO的酶 一．羧基养细菌的CO脱氢酶 二．硫酸盐还原细菌的CO脱氢酶 三．光养厌氧菌的CO脱氢酶 四．甲烷养细菌的甲烷单加氧酶 根瘤菌的根瘤 满江红鱼星藻 地衣 3、联合固氮菌 联合固氮作用是固氮微生物与植物之间存在的一种简单共生现象。它既不同于典型的共生固氮作用，也不同于自生固氮作用。这些固氮微生物仅存在于相应植物的根际，不形成根瘤，但有较强的专一性，固氮效率比在自生条件下高。 通常在水域环境中，共生性固氮系统不常见。大量的氮主要靠自由生活的微生物固定，在有氧区主要是蓝细菌的作用，在无氧区主要是梭菌的作用。 1、生物固氮反应的6要素 固氮酶 ATP的供应 还原力及其传递载体 还原底物— N2 镁离子 严