蛋白质分离色谱填料与其特性.pdf

Vol. 13 功 　能 　高 　分 　子 　学 　报 No. 3 2000 年 9 月 　　　　　　　　　　　　　Journal of Functional Polymers 　　　　　　　　　　　　　Sep. 2000 综 述 蛋白质分离色谱填料及其特性 曾庆冰 , 　许家瑞 , 　符若文 ( 中山大学材料科学研究所 , 教育部聚合物复合材料及功能材料重点实验室 , 广东 广州 510275) 摘 要 : 　将载体按其化学组成分类 ,综述蛋白质色谱填料的进展 。文中还讨论了键合固定相 、多孔复合材料 和混合载体等新型复合材料不同的制备方法以及这些载体在层析过程中的主要特性 。 关键词 : 　色谱 ; 填料 ; 蛋白质 ( ) 中图分类号 :O63 　　　文献标识码 : 　A 　　　文章编号 : 　1008 - 9357 2000 03 - 0343 - 06 在过去的几十年中 ,人们不断尝试引入新填料以完善蛋白质分离 。多种基质材料 ,包括有机和无机 聚合物 ,被用作色谱填料 。近年来 ,又不断开发出新型复合材料 。 简略说来 ,蛋白质的吸附和解吸取决于粒间溶质分子的对流迁移 、分子从溶液中向颗粒外表面扩 散 、在多孔结构间的扩散 、以及在表面活性部位的吸附。通过改变洗脱条件 ,吸附应是可逆的。根据蛋 白质的结合特性和具体用途 ,每次分离时都应进行参数调整以达到最优化 。尽管色谱参数 ,如 :流动相 成分 、固定相设计和柱的几何形态必须根据蛋白质分离的具体情况进行优化 ,但选择色谱介质存在一些 通用标准 。首先 ,材料必须具备化学 、物理稳定性和 良好的机械性能以满足高流速条件 。此外 ,材料中 应不含与蛋白质发生非特异性结合的基团 ,但易产生衍生物以便引入功能基用于交互作用色谱 。材料 对再生和洗涤条件的耐受性也是一个重要参数 。最后 ,材料颗粒大小和孔径分布在生产过程中应能控 制 ,且产品重复性良好 。 1 　基本载体材料的进展 基本载体对填料的机械 、化学和热稳定性起决定性作用 。由于蛋白质的吸附/ 解吸机制发生在界 面 ,故色谱性能是与载体的结构特征和固定相的物理化学性质紧密联系的。理想情况下 ,固定相应耐化 学侵蚀并能有效屏蔽核心被溶剂降解或与生物分子的非特异性反应 。根据化学组成可将载体材料分为 无机聚合物 ,有机聚合物和复合材料几类 。 1 . 1 　无机聚合物 ( ) 氧化硅是应用最广泛的色谱填料 , 已有多种粒度和孔径 5 - 400 nm 的产品 , 最常用的氧化硅颗粒 是由硅酸缩合后经热处理而制得 。孔径在 1 000 nm 以上的大孔氧化硅已通过增大间隙孔氧化硅的孔 径 ,并在有机盐存在的条件下进行煅烧而制得 〔1〕。近来 , 已合成出平均孔径大约为 2 000 nm 的连续氧 化硅柱 〔2 〕,但这种材料还没有用于生物分子纯化 。尽管氧化硅以不同形式存在 ,常用于色谱的是无定 形氧化硅 。氧化硅在压力下稳定 ,并易于被衍生化以引入官能团。纯氧化硅颗粒是无定形的 ,主要成分 ( ) ( ) ( ) 是 SiO ·H O 。表面硅氧键可以是硅氧烷键 Si - O - Si 、孤立硅醇基 Si - OH 或通过氢键缔合的硅 2 2 n ( ) 醇基 Si - O …HO - Si 。 ( 氧化硅在温和碱性条件下不稳定 ,在p H 8 时彻底溶解 。此外