小鼠PICK1与Orai1蛋白质间的相互作用研究.pdfVIP

2O15年 5月 四川大学学报 (自然科学版) M ay． 2015 第 52卷 第 3期 Journa1ofSichuanUniversity(NaturalScienceEdition) V01．52 No．3 doi：103969／j．issn．0490—6756．2015．03．039 小 鼠PICK1与 Orail蛋 白质间的相互作用研究 蔡佩玲，程丽佳，王 婷 (成都大学基础医学与护理学院，成都 610106) 摘 要：从小鼠脑组织中提取总RNA，RT-PCR扩增 PICK1及 Orail的 CDS序列 ，构建原核 表达栽体 GST—PICK1及真核表达载体 myc-Orail，重组质粒经 SalI和 NotI双酶切鉴定后 测序．正确的质粒 myc—Orail在 HEK293细胞中表达收获过表达蛋 白，GST—PICK1进行原核 表达并获得融合蛋 白．将纯化后 的GsT—PICK1蛋 白条带切下，进行蛋白质液相质谱分析．后 将 myc—Orail蛋 白与 GST—PICK1蛋 白混合，进行 GST—pulldown实验 ，western-blot检测到 myc—Orail的条带．结果表 明PICK1与 Orail在体外有相互作用． 关键词 ：PICKl；Orail；GST-Pulldown；相互作用 中图分类号：Q786 文献标识码 ：A 文章编号：0490—6756(2015)03—0689—08 Research on Interaction between PICK1and0railofM ouse CAIPei—Ling，CHENGLi—Jia，WANG Ting (SchoolofBasicMedicineandNursing，ChengduUniversity，Chengdu610106，China) Abstract：TotalRNA ofmicebrainwasextracted，CDS fragmentofPICK1and0railwasobtainedby RT—PCR ，CDSwererespectivelysub—clonedintopGEX一4T一2withGST tagtogenerateGST—PICK1and sub—clonedintopRK5withmyctagtogetmyc-Orail，andrecombinantsweresequencedafterconfirma- tionbydigestedwithSalIandNotI．Correctmyc—OrailvectorwasexpressedinHEK293cells，GST— PICK1vectorwasexpressed inBL21competentcells．GST—PICK1fusion proteinswereanalyzedwith proteinliquidmassspectrometry afterbeingpurifiedand cutSDSgelofthetargetband．And thenGST—PICK1fusionproteinandmyc—OrailfusionproteinweremixedtoapplyGST-pulldownexper- iment，andmyc—Orailbandwasdetectedbywestern—blot．ResultindicatesPICK1and0railinteracted Ⅵ tro． Keywords：PICK1；0rail；GST—pulldown；Interaction 换体来调控 ，如电压门控通道、配体 门控通道及钙 1 引 池调控钙离子通 道 (Storeoperatedcalcium chan— Ca 是最常见的一种第二信使 ，调节从受精 nels，SOC)． 开始到细胞凋亡整个生命过程 中几乎所有的