第4节 毛细管电泳-2014.pdfVIP

第4节毛细管电泳 1 4.1、概述 4.2、理论基础 4.3、毛细管电泳仪 4.4、毛细管电泳分离模式 4.5、毛细管电泳应用 2 4.1、概述 电泳：在电解质溶液中，位于电场中的带电离 子在电场力的作用下，以不同的速度向其所带电荷 相反的电极方向迁移的现象。 1937年，Tiselius(瑞典)将蛋白质混合液放在两段缓冲溶 液之间，两端施以电压进行自由溶液电泳，第一次将人血清 提取的蛋白质混合液分离出白蛋白和α、β 、γ球蛋白；1948 年，获诺贝尔化学奖。 3 4.1.1、经典的电泳分析方法 利用电泳现象对化学或生物物质进行分离分析的方法和技术 叫电泳法或电泳技术。 按形状分类：U型管电泳、柱状电泳、板电泳； 按载体分类：滤纸电泳、琼脂电泳、聚丙烯酰胺电泳、 自由电泳； 传统电泳分析：操作烦琐，所用分离柱的柱径大，柱较 短，分离效率不高（远低于HPLC），温度影响大。 4 4.1.2、毛细管电泳分析方法 1981年，Jorgenson等 用75 m 内径石英毛细管 进行电泳分析，柱效高达 40万/m ，迅速发展成为可 与GC、HPLC相媲美的崭 新的分离分析技术——高 效毛细管电泳。 5 高效毛细管电泳在技术上采取了两项重要改进： 一、采用了 0.1mm 内径的毛细管 二、采用了高达数万伏的电压  毛细管的采用使产生的热量能够较快散发，大大减小了 温度效应，使电场电压可以很高。  电压升高，电场推动力大，又可进一步使柱径变小，柱 长增加。  高效毛细管电泳的柱效远高于高效液相色谱，理论塔板 数高达几十万/米，特殊柱子可以达到数百万。 6 高效毛细管电泳的特点 1、仪器简单、易自动化 电源、毛细管、检测器、溶液瓶 2、分析速度快、分离效率高 可在3.1 min 内分离36种无机及有机阴离子，4.1 min 内分离 了24种阳离子；分离柱效：105～107/m理论塔板数 3、操作方便、消耗少、成本低 进样量极少，nL水平 4、环境友好 5、应用范围极广 无机物、有机物、生物小分子、中性分子；生物大分子等 7 4.2、理论基础 4.2.1 电泳 电泳是指带电离子在电场中的定向移动，不同离子具有不同 的迁移速度，迁移速度与哪些因素有关？ 当带电离子以速度ν 在电场中移动时，受到大小相等、方 向相反的电场推动力和平动摩擦阻力的作用。 电场力：FE = qE 阻 力：F =fν 故： qE =fν q—离子所带的有效电荷； E —电场强度； ν—离子在电场中的迁移速度； f —平动摩擦系数 8 所以，迁移速度： qE q  E