2018届一轮复习苏教版基因工程教案.docVIP

选修3　现代生物科技专题 第1讲　基因工程 考点一| 基因工程的基本工具 1．基因工程的概念及优点 (1)概念：是指在体外通过人工“剪切”和“拼接”等方法，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞，并使重组基因在受体细胞中表达，产生人类需要的基因产物的技术。 (2)遗传原理：基因重组。 (3)优点： 与杂交育种相比：克服了远缘杂交不亲和的障碍。 与诱变育种相比：能定向改造生物的遗传性状。 2．基因工程的基本工具 (1)限制性核酸内切酶 来源：主要从原核生物中分离纯化而来。 作用：识别特定的核苷酸序列并切开相应两个核苷酸之间的磷酸二酯键。 结果：产生黏性末端或平末端。 (2)DNA连接酶 常用类型 E-coli DNA连接酶 T4DNA连接酶 来源 大肠杆菌 T4噬菌体 功能 连接黏性末端 连接黏性末端和平末端 结果 恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键 (3)载体 常用载体——质粒 其他载体：λ噬菌体衍生物、动植物病毒等。 1．限制酶 (1)识别序列的特点：呈现碱基互补对称，无论是奇数个碱基还是偶数个碱基，都可以找到一条中心轴线，如，以中心线为轴，两侧碱基互补对称；以为轴，两侧碱基互补对称。 (2)切割后末端的种类 2．限制酶和DNA连接酶的关系 (1)限制酶和DNA连接酶的作用部位都是磷酸二酯键。 (2)限制酶不切割自身DNA的原因是原核生物中不存在该酶的识别序列或识别序列已经被修饰。 (3)DNA连接酶起作用时，不需要模板。 3．载体 (1)条件与目的 条件 目的 稳定并能复制 目的基因稳定存在且数量可扩大有一个至多个 限制酶切割位点 可携带多个或多种外源基因 具有特殊的标记基因 便于重组DNA的鉴定和选择 (2)作用 作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞内。 利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量复制。 视角1 考查基因工程的三种操作工具 1．(2017·江苏无锡质检)如图表示化学方法合成目的基因的过程。据图分析下列叙述正确的是(　　) A．过程需要DNA连接酶 B．过程需要限制性核酸内切酶 C．目的基因的碱基序列是已知的 D．若某质粒能与目的基因重组，则该质粒与的碱基序列相同 C　[DNA连接酶是将两个DNA分子的黏性末端或平末端的“缝隙”连接起来，而过程是两条链的碱基互补配对，不需要DNA连接酶，A错误；限制性核酸内切酶是用来切割DNA的，而过程不需要，B错误；当某质粒与目的基因用限制酶切割后有互补的黏性末端，就可以形成重组DNA分子，D错误。] 2．(2017·哈师大附中模拟)若要利用某目的基因(见图甲)和P1噬菌体载体(见图乙)构建重组DNA(见图丙)，限制性核酸内切酶的酶切位点分别是BglⅡ(A1GATCT)、EcoRⅠ(G1AATTC)和Sau3AⅠ(1GATC)。下列分析合理的是(　　) A．用EcoRⅠ切割目的基因和P1噬菌体载体 B．用BglⅡ和EcoRⅠ切割目的基因和P1噬菌体载体 C．用BglⅡ和Sau3AⅠ切割目的基因和P1噬菌体载体 D．用EcoRⅠ和Sau3A切割目的基因和P1噬菌体载体 D　[解答本题的关键是要看清切割后目的基因插入的方向，只有用EcoRⅠ和Sau3AⅠ切割目的基因和P1噬菌体载体，构建的重组DNA中RNA聚合酶在插入的目的基因上的移动方向才一定与图丙相同，而且切割后的目的基因和载体不会发生自身环化。] 确定选择限制酶种类的方法 1．根据目的基因两端的限制酶切点确定限制酶的种类 (1)应选择切点位于目的基因两端的限制酶，如图甲可选择PstⅠ。 (2)不能选择切点位于目的基因内部的限制酶，如图甲不能选择SmaⅠ。 (3)为避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接，也可使用不同的限制酶切割目的基因和质粒，如图甲也可选择用PstⅠ和EcoRⅠ两种限制酶(但要确保质粒上也有这两种酶的切点)。 2．根据质粒的特点确定限制酶的种类 (1)所选限制酶要与切割目的基因的限制酶相一致，以确保具有相同的黏性末端。 (2)质粒作为载体必须具备标记基因等，所以所选择的限制酶尽量不要破坏这些结构，如图乙中限制酶Sma会破坏标记基因；如果所选酶的切点不止一个，则切割重组后可能丢失某些片段，若丢失的片段含复制起点区，则切割重组后的片段进入受体细胞后不能自主复制。 视角2 考查基因工程基本工具的特点及作用 3．(2017·德州模拟)下面为大肠杆菌及质粒载体的结构模式图，据图回答下列问题： (1)a代表的物质和质粒的化学本质都是_______________________， 二者还具有其他共同点，如________，________(写出两条即可)。 (2)若质粒DNA分子的切割末端为，则与之连接的目的基因切割末端应为________；可使用________把质粒和目的基因连接