第6章常用分子生物学技术药学本科2012.ppt

4、基因芯片应用 可在基因组水平进行基因表达和发现研究、突变、序列测定等，已方泛应用于基因组研究和人类疾病的诊断等多领域。 如何敲除其胰岛素基因，成为糖病模型？ Holliday模型的4个关键步骤： 两个同源染色体DNA排列整齐； 21-23nt. 2-nt 3 overhangs ( UU overhangs ). G/C 含量: 30-50%. 无不配对碱基. BLAST : eliminate any target sequences with significant homology to other coding sequences. design and test 3–4 siRNA sequences 用siRNA表达质粒 或病毒表达载体：高效。 1. 化学裂解法 (Maxam ＆Gilbert ,1977 ) 2. 双脱氧链末端终止法 (Sanger ,1977) 3. DNA自动化序列分析 3、肿瘤治疗 用RNAi特异性地抑制癌基因、癌相关基因或突变基因的过度表达，使这类基因保持在静默或休眠状态，从而有望用这种新的手段治疗各种恶性肿瘤。 (1)RNAi可应用于敲除点突变激活的癌基因， (2)RNAi应用于抑制插入基因及融合基因表达， (3)RNAi可应用于抑制基因扩增。 3、肿瘤治疗 Survivin