猪TLR7基因胞外区部分片段的克隆_表达及其重组蛋白的纯化分析.pdfVIP

DO I :10.13989/j .cnki .0517 -6611.2009.24.135 , JournalofAnhuAgr.Sc.2009, 37(24):11450-11452, 11463 　李菲菲　　傅真治 TLR7、 1, 2 1 1 2 1, 2 ＊ 和燕玲 , 房永祥 , 陈国华 , 刘磊 , 景志忠 　(1., , , , 730046;2., 730070) 　[目的]获得高表达量的蛋白, 为进一步研制单 隆抗体提供较好的免疫原, 同时也可为 TLR7 胞外区该片断蛋白未知区域的结构 和功能研究奠定基础。 [方法] 应用 PCR技术从重组质粒 pcDNA3.1/CT-GFP-pTLR7上扩增出编码猪 TLR7 基因胞外区N端第 27 ～202 位氨基酸序列, 利用 BamHⅠ和 HndⅢ酶切位点将其插入到原核表达载体 PET30 a中, 重组质粒转化 BL21(DE3)后, 在不同条件下诱导表 达。 [结果] 经 SDS分析表明, 重组菌表达出约 26 kD的融合蛋白, 并证实主要以包涵体形式表达, 其最佳诱导表达条件是37 ℃、 0.5 mmol/LIPTG诱导 6 h, 表达量可接近 50%;纯化的重组蛋白免疫小鼠后, 间接 ELISA检测抗体效价, 结果该蛋白免疫 BALB/c小鼠 5 效价达 10。 [结论] TLR7胞外区该片断重组蛋白具有很好的抗原性, 可以作为单 隆抗体研制的免疫原。 　猪 TLR7胞外区片段;重组蛋白;抗原性 　S828　　　A　　　0517-6611(2009 )24-11450-03 ResearchontheCloneandExpressonoftheExtracellularDomanFragmentofPorcneTLR7 GeneandAnalyssofthePurfcatonof tsRecombnantProten HEYan-lngeta　l(KeyLaboratoryofAnmalParastologyofGansuProvnc,eKeyLaboratoryofVeternaryPublcHealthofMnstryofAgr- cultur,eStateKeyLaboratoryofVeternaryEtologcalBology, LanzhouVeternaryResearchInsttut,eChneseAcademyofAgrculturalScence,s Lanzhou, Gansu730046) Abstract　[Objectve] Toobtanahghexpressonoftheproten, nordertofurtherthedevelopmentofmonoclonalantbodesntoLunogento provdebettermmune-derved.butalsofortheextracellulardomanofTLR7 protenfragmentsofunknownstructureandfunctonoftheregonlay thefoundatonforresearch.[Methods] PCRtechnologyfromtherecombnantplasmdwasamplfedpcDNA3.1/CT-GFP-pTLR7 porcneTLR7 geneencodngtheextracellulardomanofN-secton27-202 ofamnoacdsequenc,eusngBamHⅠ andHndⅢ restrctonsteswllbetsnsert- edntotheprokaryotcexpressonvectorPET30 ,atherecombnantplasmdntoBL21 (DE3 )afternductonofexpressonunderdfferentcond- ton.s[Results] bySDSanalyssshowedthattheexpressonofrecombnantbacteraofabout26 kDfusonprotenandconfrmedthatthe manformofexpressonnnclusonbode,sthebestcondtonsnducedtheexpressonof37 ℃, 0.5 mmol/LIPTGnduced6 h, ex