转基因猪在农业和生物医学中的应用.pdf

　转基因猪在农业和生物医学中的应用 项智锋 　译自《Theriogenology》2003 , Vol 59 , 115～123 　　 张德福 　校 摘 　　要 　　早期方法制备转基因猪仅局限于外源基因的随机整合 。胎儿体细胞同源重组技术与核移植技 术相结合 , 使猪 的基因组定位修饰成为可能 。在人猪器官移植研究中, 对引起超急排斥反应 ( HAR) 基因进行敲除, 首次实现了猪基因组的定位修饰 。因为猪被广泛用作人类疾病模型, 所以 基因修饰为改变这些模型或创建更多模型提供了较好的途径 。然而核移植动物易出现表型异常 。 表型异常可能是外源基因改变而未被正常转入所致 。虽然利用核移植基因定位修饰技术已成功制 备出转基因动物 ,但核移植技术 、体细胞培养条件及基因修饰技术尚待进一步完善 。 卵母细胞转导法制备的第一头转基因猪 , 其胚胎移 前 　　言 植前的囊胚也是体外培养的胚胎产品。这些转基因 转基因猪研究中, 对生殖细胞转导的方法首先 动物及它们的后代都能在不同的组织中表达 e GFP 只是原核注射 , 后来又出现了精子载体法 , 卵母细胞 基因。 转导法( 也称为转生殖细胞基因转移) 和核移植介导 随机整合转基因猪被证明具有较大的生物医学 α 法 。近年来 , 可通过核移植技术对 ( 1 , 3) - 半乳糖 研究价值 , 在农业生产上也有很重要的潜在意义 。 苷转移酶基因的定位修饰来制备转基因猪 。各种方 预测基因定位修饰技术在这两大领域中将会有更大 法都有其优缺点, 主要改进集中在 目的基因修饰的 的应用 ,通过同源重组技术与核移植技术相结合的 难易程度 、修饰的基因类型及转基因在后代中表达 基因定位修饰技术制备转基因猪还需要逐步的完 的稳定性上 。通过原核注射 、精子载体和卵母细胞 善 。下面将讨论基因定位修饰在生物医学和农业中 的转导,D NA 片段整合位点及拷贝数是不确定的, 的应用 , 同时对如何有效进行同源重组和克服核移 卵母细胞转导更是如此 , 所 以外源 D NA 整合的区 植克隆后代的表型异常问题进行探讨 。 域 , 同时某种程度上 D NA 未转入的区域 , 就决定了 基因定位修饰在生物医学领域中的应用 转基因转录表达的水平 。相反 , 通过核移植技术与 同源重组技术相结合 , 就可在核移植前对细胞进行 猪被用作模拟人类疾病过程的动物模型, 作为 特定性修饰 。 外科手术和器官移植的固定基因模型, 作为用于人 核移植基因定位修饰技术的关键环节是猪胚胎 类治疗的器官库 , 在生物医学中的应用已有几十年 的体外培养能力 。前几次会议已做过概述 。猪卵母 的历史 。而通过对猪基因组进行特异或非特异性修 细胞成熟 、受精及接下来胚胎的培养 ,这些体外操作 饰 ,这些作用就能被大大加强 。经典的显微注射转 条件的稳定性与可重复性 ,培养条件的完善与确定, 基因方法中大部分的工作内容用于直接对猪进行基 这些都不容低估 。通过体外发育原核胚的显微注 因组的改造与优化 , 以作为异种器官移植中人类细 射 ,进行及时的胚胎移植等措施 ,体外培养时间可缩 胞 、组织和器官的供给源 。 短 。然而 , 如果 目的是生产体外胚胎 ,及在囊胚时进 器官移植 已成为治疗人类器 官衰竭相关疾 行非手术