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细胞破碎简介 9 O+ ? w6 F9 I4 ?/ F) i5 U　　分离提纯某一种蛋白质时，首先要把蛋白质从组织或细胞中释放出来并保持原来的天然状态，不丧失活性。所以要采用适当的方法将组织和细胞破碎。不同的生物体或同一生物体的不同部位的组织，其细胞破碎的难易不一，使用的方法也不相同，如动物脏器的细胞膜较脆弱，容易破碎，植物和微生物由于具有较坚固的纤维素、半纤维素组成的细胞壁，要采取专门的细胞破碎方各种组织适用的细胞破碎方法5 R0 T3 X1 N6 S??P |$ R 细胞破碎方法* A: g7 Z$ p??d* p: G3 r# z+ O* q 组织种类( S: Y# F; A2 \6 ?2 ~: F 旋刀式匀浆 大多数动植物组织9 K2 |5 k0 M/ k1 M! C: G1 u 手动式匀浆 柔软的动物组织3 Q6 N. {5 _( p5 L9 e. j5 @, g 超声8 Q4 n) S3 p( M 细胞混悬液/ |: w$ Q7 u1 ~ Z M 高速匀浆# ^# I??m/ w4 ^- M9 U2 N1 `# w; H 细菌、酵母植物细胞3 U# o; ]! m; q+ z; L7 ?7 K* I 研磨 R$ @% F, A) }0 \6 } 细菌、植物细胞 F; U* G, Q# q0 l8 m, G 高速珠磨$ Q9 z8 ^ a, Y) Y+ F; R 细胞混悬液3 q- I/ y% o1 ?2 \) E 酶溶9 W+ ^+ S4 _- s$ m 细菌、酵母 去垢剂渗透 ^) V0 i: b1 j9 o7 p 组织培养细胞5 y C* J. l8 C 有机溶剂渗透#细菌、酵母H: ` 低渗裂解5 h9 ~* ^2 t- m1 _$ Z8 Y??q 红细胞、细菌4 @) R! e1 O( S5 p8 R7 V 冻融裂解8 H/ q1 }8 E! `7 y8 T4 e 培养细胞( }0 q# j1 ^$ J( } 细胞破碎方法 / {1 ]5 R% t% ] Y% T4 @% s2 O$ K机械法　　* l) \: E- H6 F3 P2 }0 H* S( O D??T0 i　主要通过机械切力的作用使组织细胞破碎的方法，常用的器械有组织捣碎机、匀浆器、研钵和研磨、压榨器等。5 s$ p M. q% t6 ^9 K, T. h1. 组织捣碎　　将材料配成稀糊状液，放置于筒内约1/3体积，盖紧筒盖，将调速器先拨至最慢处，开动开关后，逐步加速至所需速度。一般用于动物组织、植物肉质种子、柔嫩的叶芽等，转速可高达10000rpm/M以上。由于旋转刀片的机械切力很大,制备一些较大分子如核酸则很少使用。( C# j5 _- l ]7 J+ [8 k Z( d2. 匀浆器 + ~. v9 ]0 @+ p D: V　　先将剪碎的组织置于管中，再套入研杆来回研磨，上下移动，即可将细胞研碎。匀浆器的研钵磨球和玻璃管内壁之间间隙保持在十分之几毫米距离。制作匀浆器的材料，除玻璃外，还可以用硬质塑料、不锈钢、人造荧光树脂等。此法细胞破碎程度比高速组织捣碎机为高，适用于量少和动物脏器组织。. y) a) _6 J- `0 k3 o t　　存在的问题；较易造成堵塞的团状或丝状真菌，较小的革兰氏阳性首以及有些亚细胞器，质地坚硬，易损伤匀浆阀，也不适合用该法处理。7 u7 R8 ^* V3 E$ e h3 _8 U K% l3. 研钵 ; a. r1 I$ r7 G7 v8 l　　多用于细菌或其他坚硬植物材料，研磨时常加入少量石英砂，玻璃粉或其他研磨剂，以提高研磨效果。 L??E# W5 U/ |; g6 T9 s4. 细菌磨??: g* `0 u g* l3 \$ I% t??}0 b　　是一种改良了的研磨器，比研钵具有更大的研磨面积，而且低部有出口。操作时先把细菌和研磨粉调成糊状，每次加入一小勺，研磨20-30秒即可将细菌细胞完全磨碎。: ] |8 n3 x3 k2 Y9 w8 z物理法 ; j. O6 @! ]( e8 x) ?! l　　主要通过各种物理因素使组织细胞破碎的方法。在生化制备中常用的方法有：- ~* z# U/ t0 l* c. | ?) L7 b R, G/ E1. 反复冻溶法 ; {9 W# W; m$ }0 h4 B% B6 ]　　原理：因突然冷冻，细胞内冰晶的形成及??胞内外溶剂浓度的突然改变而破坏细胞。* S, |2 u9 C??s3 M% p% W/ S　　方法：将待破碎的细胞在-20度以下冰冻，室温融解，反复几次，由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎。2 T; R1 Z8 ]; a! R7 z R7 g/