兖州卷柏乙醇提取物对人食管癌裸鼠移植瘤细胞的抑制作用.docVIP

兖州卷柏乙醇提取物对人食管癌裸鼠移植瘤细胞的抑制作用 　　[摘要] 目的 探讨兖州卷柏乙醇提取物对人食管癌裸鼠移植瘤细胞的抑制作用。 方法 构建人食管癌裸鼠移植瘤模型，随机分成5组，每组各10只，分别灌胃给药等体积的兖州卷柏乙醇提取物高、中、低剂量组（400、200、100 mg/kg），并设置阳性对照（环磷酰胺，5 mg/kg）组和阴性对照（生理盐水，0.2 mL/只） 组。每天给药1次。给药4 d后，开始测量并计算肿瘤体积。给药20 d后，处死裸鼠，称瘤重，并计算抑瘤率，肝脏、脾脏指数。 结果 实验结束后，兖州卷柏乙醇提取物高、中剂量组的肿瘤体积均比阴性对照组小且差异有统计学意义（P 　　[Key words] Ethanol extract from Selaginella Involven； Human esophagus carcinoma； Nude mice； Inhibition 兖州卷柏（selaginellae involventis，Sping）为卷柏科植物兖州卷柏的全草，也被民间称为地柏枝、金不换、金扁柏、石卷柏等，是多年生草本植物。传统医学认为其性味辛、甘、平、涩。中医运用兖州卷柏治疗疾病已有悠久的历史，其主治湿热黄疸、肺炎、咳喘、痔疮、痢疾、烫伤、小儿惊风等[1]。在民间关于肝病的治疗方面，兖州卷柏取得非常良好的效果[2]。研究人员运用现代药学研究方法证明了卷柏属植物中含有多种有效化学成分，如：生物碱类、黄酮类、炔酚类等。现代药理研究表明卷柏属植物具有多方面的药理活性，如抗氧化、抗衰老、抗菌、抗病毒、抗肿瘤等[3]。谢永华等[4]研究表明兖州卷柏乙醇提物对人食管鳞癌细胞有一定的抑制作用。在此基础上，本研究进一步观察充州卷柏乙醇提物对人食管癌细胞株（EC-9706）裸鼠移植瘤生长情况的影响，为其作为天然抗肿瘤药物的开发提供实验依据 1 一般材料 1.1 药材 兖州卷柏全草购于福建省三明市宁化县草药市场，并经泉州市医药研究所苏齐主任医师鉴定为卷柏科，卷柏属，兖州卷柏植物 1.2 试剂 人食管鳞癌细胞株（EC-9706）购自天呈科技生物公司。胎牛血清、PBS、DMSO、RPMI1640培养基（赛默飞世尔科技公司）。生理盐水（NS，福州海王福药有限公司），环磷酰胺（CTX，江苏恒瑞医药股份有限公司）。二氧化碳培养箱（HF90，上海力申科学仪器有限公司），生物安全柜（BSC-1500IIA2-X，济南鑫贝西生物技术有限公司），倒置显微镜（XG-202，南京江南永新光学有限公司），高压灭菌锅（HAV-50，日本平山制作所株式会社），电热恒温水槽（DK-600，上海精宏实验设备有限公司），天子天平（BSA1245，德国赛多利斯有限公司），台式低速离心机（L500，湖南湘仪实验仪器开发有限公司） 1.3 实验动物 SPF级BALE/c裸鼠购自上海斯莱克实验动物有限公司[动物合格证号SCXK（沪）2012-0002]，4～5周龄，雌雄不限，体重16～19 g，SPF级环境饲养5 d后用于实验 2 方法 2.1 兖州卷柏乙醇提取物的制备 兖州卷柏全草用粉碎机粉碎2～4 min，过100目筛备用。称取20 g兖州卷柏干粉末，放入圆底烧瓶中，然后加入80%乙醇溶液200 mL。60℃回流提取3次，每次处理60 min。提取液过滤，旋转蒸发仪蒸发，得到1.6 g乙醇提取物浸膏 2.2 人食管癌小鼠移植瘤动物模型的构建 人食管鳞癌细胞（EC-9706）用含10%胎牛血清（FBS）的RPMI-1640培养液（含青霉素和链霉素各100 U/mL）中，于37 ℃、5%CO2、饱和湿度条件恒温常规培养。0.25%胰蛋白酶消化对数生长期的EC-9706细胞，用RPMI培养液将细胞密度稀释为1×108个/mL。BALB/c裸鼠右前肢腋部皮下接种0.2 mL肿瘤细胞，观察7 d，选择肿瘤直径1 cm左右的裸鼠进行实验 2.3 分组、给药与处理 将50只裸鼠按随机数字表法分为兖州卷柏乙醇提取物高、中、低3个剂量实验组，并设置阳性对照（环磷酰胺，CTX）组和阴性对照 （生理盐水，NS）组。分别灌胃给药等体积的兖州卷柏乙醇提取物高、中、低剂量组（400、200、100 mg/kg），阳性对照 （CTX，5 mg/kg） 组和阴性对照（NS，0.2 mL/只）组。每天给药1次，连续给药20 d。给药过程中观察裸鼠生长状况和体重变化。治疗后第4天开始测量瘤长（L）和瘤宽（W），根据公式：肿瘤体积（V）=0.5×L×W2 mm3计算肿瘤体积。20 d后，用吸入二氧化碳的方法处死裸鼠，并称量肿瘤、裸鼠肝脏和脾脏的重量。根据以下公式计算抑瘤率和脏器指数 2.4 统计学方法