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四种当归多糖提取方法的比较研究 　　摘 要： 对热水浸提法、超声波法、纤维素酶与果胶酶法这4种提取当归多糖的方法进行比较。以当归多糖得率为指标，用苯酚-硫酸法对当归多糖进行测定，优化4种方法的提取工艺并比较。结果显示，在最佳工艺条件下，热水浸提法的多糖得率为21.78%，超声波法为22.15%，纤维素酶法为24.55%，果胶酶法为24.81%。酶法是当归多糖提取较佳的选择。纤维素酶法的最佳提取条件是加酶量1.0%，提取温度60 ℃，提取时间60 min，pH值6.0；果胶酶法的最佳提取条件是加酶量1.0%，提取温度50 ℃，提取时间90 min，pH值5.5。 　　关键词：当归；多糖；热水提取法；超声提取法；酶提取法 　　中图分类号：R284.2 文献标识码：A DOI编码：10.3969/j.issn.1006-6500.2013.10.009 　　当归为伞形科植物当归[Angelica sinensis（Oliv.）Diels]的干燥根，是一种常用的传统中药，有补血活血、调经止痛、润肠通便之功效[1]。近年来对当归的药理研究表明，从其水溶性部分提取的当归多糖具有丰富的生物活性，具有明显的补血活血、免疫调节、抗肿瘤、抗辐射损伤等药理活性[2]。因此，当归多糖是当归药效成分研究的热点。对于当归多糖的提取方法，文献报道的多为热水浸提法[3-5]，还有超声提取法[6]、酶提取法[7]、微波提取法[8]。现有文献均为对某一种提取当归多糖的方法进行研究，未见对几种方法同时进行比较研究的文献报道。笔者采用同一种当归原料，以当归多糖得率为考察指标，对热水浸提法、超声波法、纤维素酶法和果胶酶法这4种当归多糖提取法进行研究并进行比较，得出较佳的当归多糖提取法，这对当归多糖的开发应用具有一定意义。 　　1 材料和方法 　　1.1 材料和仪器 　　原料：当归头（广东紫云轩药业有限公司），购自肇庆市大森林药店，产自甘肃。 　　试剂：纤维素酶（2 000 IU·g-1）、果胶酶（20 000 IU·g-1），北京鸿润宝顺科技有限公司。苯酚、葡萄糖、无水乙醇、浓硫酸、醋酸、醋酸钠、乙酸锌、亚铁氰化钾、硫酸铜、次甲基蓝、酒石酸钾钠、氢氧化钠均为分析纯。试验用水为去离子水。 　　仪器：S22PC 可见分光光度计（上海棱光技术有限公司）；SK8200H台式超声清洗仪（上海科导超声仪器有限公司）；DHG-9070B型数显电热恒温干燥箱（上海浦东荣丰科学仪器有限公司）。HH-S2系列恒温水浴锅（江苏省金坛市环宇科学仪器厂）；电子分析天枰AUY120（Shimadzu Corporation Janpan）；pHS-29A型酸度计（上海大普仪器有限公司）。 　　1.2 当归原料的处理 　　将当归用粉碎机粉碎，在65～70 ℃烘干，密封备用。 　　1.3 当归多糖提取的方法 　　1.3.1 热水浸提法 准确称取2 g当归，置于烧杯中，加入蒸馏水，放入恒温水浴锅浸提，冷却，转移至250 mL容量瓶，定容，过滤，滤液备用。 　　1.3.2 超声波法 准确称取2 g当归，置于烧杯中，加入蒸馏水，放入超声仪中超声提取，冷却，转移至250 mL容量瓶，定容，过滤，滤液备用。 　　1.3.3 酶法提取 准确称取2 g当归，置于烧杯中，加入HAc-NaAc缓冲溶液，加酶保温一定时间，加热灭酶，冷却，转移至250 mL容量瓶，定容，过滤，滤液备用。 　　1.4 当归多糖的测定与计算 　　1.4.1 测定波长的选择 准确称取干燥至恒质量的葡萄糖0.1 g，配制成0.1 mg·mL-1的葡萄糖水溶液，吸取0.6 mL置于10 mL刻度试管中，加水1.4 mL，然后加5%的苯酚溶液1 mL，摇匀，迅速加入浓硫酸5 mL，摇匀，放置10 min，置沸水浴中加热15 min，取出用流水冷却至室温。以蒸馏水2.0 mL，按上述方法加入5%苯酚和硫酸作试剂空白，从480～495 nm进行吸光度测定，结果得出在487 nm处吸光度最大，因此选择测定波长为487 nm。 　　1.4.2 标准曲线的绘制 准确吸取0.1 mg·mL-1标准葡萄糖溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2 mL，分别置于试管中，各加入蒸馏水使总体积为2.0 mL，按1.4.1中的步骤操作，于487 nm波长处测吸光度A，并得出工作曲线。 　　1.4.3 当归中还原糖与蔗糖等低聚糖总量的测定 准确称取2 g当归，置于250 mL容量瓶中，加入100 mL水，在45 ℃水浴中提取30 min，冷却，加入5 mL醋酸锌与5 mL亚铁氰化钾溶液，加水至刻度，混匀，静置30 min，干滤纸过滤，弃去初滤液。取滤液50 mL至100 mL容量瓶，加入6 mol·L-1的HCl 5 mL，