山东小麦黄花叶病毒的分子检测与鉴定.docVIP

山东小麦黄花叶病毒的分子检测与鉴定 　　摘 要：利用RT-PCR对2012年山东10个地区送检的105个小麦样品进行了检测，从泰安、临沂、枣庄3个地区的样品中检测到了小麦黄花叶病毒（Wheat yellow mosaic virus，WYMV）。这3个地区WYMV分离物CP基因的核苷酸一致率为976%～983%，氨基酸一致率为983%～99.0%。在利用CP基因核苷酸序列构建的系统进化树中，这3个分离物均与WYMV分离物聚类到一起，其中枣庄分离物和河南分离物（FR828007）亲缘关系更近。 　　关键词：小麦黄花叶病毒；CP基因；系统进化分析 　　中图分类号：Q781 文献标识号：A 文章编号：1001-4942（2012）11-0008-04 　　Molecular Detection and Identification of Wheat Yellow Mosaic Virus 　　in Shandong Province 　　Cong QianQian， Xu FeiFei， Li XiangDong*， Zhang GuangMin 　　（Department of Plant Pathology， College of Plant Protection， Shandong Agricultural University， Taian 271018， China） 　　Abstract One hundred and five wheat samples collected from 10 districts of Shandong Province were detected for wheat yellow mosaic virus （WYMV） using RT-PCR. WYMV was detected from samples from Taian， Linyi and Zaozhuang. The coat protein genes of WYMV from these three areas shared the nucleotide identity of 97.6%～98.3% and the amino acid identity of 98.3%～99.0%. In the phylogenetic tree constructed based on the nucleotide sequence， the three isolates were clustered together with other WYMV isolates. The isolates from Zaozhuang had closer genetic relationships with the isolate from Henan. 　　Key words Wheat yellow mosaic virus； CP gene； Phylogenetic analysis 　　禾谷多黏菌（Polymyxa graminis L）是一种专性寄生于禾本科植物根部的低等真核生物，可以传播多种植物病毒，导致产量严重损失[1]。禾谷多黏菌传播的小麦病毒有小麦黄花叶病毒（Wheat yellow mosaic virus，WYMV）、中国小麦花叶病毒（Chinese wheat mosaic virus，CWMV）、小麦梭条斑花叶病毒（Wheat spindle streak mosaic virus，WSSMV）和土传小麦花叶病毒（Soil-borne wheat mosaic virus，SBWMV）等[2]。 　　2012年，在山东部分地区的冬小麦上发现了一种由禾谷多黏菌传播的病毒病，感病小麦植株表现矮化和黄化花叶等症状。本研究利用RT-PCR的方法，对山东10个地区送检的疑似小麦黄花叶病毒病的样品进行了检测，并对部分病毒分离物的外壳蛋白（CP）基因进行测序分析。 　　1 材料与方法 　　11 材料与试剂 　　疑似病毒病的小麦样品由泰安、临沂、青岛、烟台、德州、淄博、菏泽、枣庄、日照和威海等10个地市植保站提供，共105个样品。 　　试验所用TransZol购自TransGen公司；反转录试剂盒购自TransGen公司；RCR试剂、T4连接酶和pMD18-T克隆载体购自大连宝生物公司；回收试剂盒购自TransGen公司；其它化学试剂均为国产分析纯。 　　12 试验方法 　　121 植物总RNA的提取 参照TransZol试剂盒的（TransGen公司）说明，从新鲜的植物材料中提取总RNA。称取 02 g 样品于干热灭菌的研钵中加液氮研磨，加1 ml TransZol 剧烈振荡，静置5 mi