生物有机化学-蛋白质.ppt

三、蛋白质的性质 Click to add title in here Click to add title in here 2 3 2.蛋白质的胶体性质 蛋白质分子量高，它在水溶液中形成的颗粒具有胶体溶液的特征，如布朗运动、电泳现象、不能透过半透膜。利用蛋白质不能透过半透膜的性质，可用羊皮纸、玻璃纸来可分离、提纯蛋白质。 蛋白质的水溶液是一种稳定的胶体，这是因为蛋白质的表面有许多的极性基团，如：－NH3＋、－COO－ 、－OH、-SH、-CONH2等，它们都具有高度的亲水性，当与水接确时，极易吸附水分子，使蛋白质颗粒外围形成一层水化膜，将颗粒彼此隔开，不致因互相碰撞凝聚而沉淀。 蛋白质形成稳定的亲水胶体的另一原因是蛋白质颗粒在等电情况下带有相同的电荷，使蛋白质颗粒之间相互排斥，保持一定距离，不至相凝集沉淀。 三、蛋白质的性质 Click to add title in here Click to add title in here 2 3 3.蛋白质的沉淀反应 蛋白质在溶液中的稳定性是有条件的、相对的。如果加入适当的试剂使蛋白质分子处于等电点状态或失去水化层（消除相同电荷，除去水膜），蛋白质胶体溶液就不再稳定并将产生沉淀。 定义：蛋白质在溶液中靠水膜和电荷保持其稳定性，水膜和电荷一旦除去，蛋白质溶液的稳定性就被破坏，蛋白质就会从溶液中沉淀下来，此现象即为蛋白质的沉淀作用。 三、蛋白质的性质 Click to add title in here Click to add title in here 2 3 （1）可逆沉淀 定义：在温和条件下，通过改变溶液的pH或电荷状况，使蛋白质从胶体溶液中沉淀分离。 在沉淀过程中，结构和性质都没有发生变化，在适当的条件下，可以重新溶解形成溶液，所以这种沉淀又称为非变性沉淀。 可逆沉淀是分离和纯化蛋白质的基本方法，如等电点沉淀法、盐析法和有机溶剂沉淀法等。 三、蛋白质的性质 Click to add title in here Click to add title in here 2 3 a盐析 在蛋白质的水溶液中，加入大量高浓度的强电解质盐如硫酸铵、氯化钠、硫酸钠等，可破坏蛋质分子表面的水化层，中和它们的电荷，因而使蛋白质沉淀析出，这种现象称为盐析。 盐析的机理： 破坏蛋白质的水化膜，中和表面的净电荷。 盐析法是最常用的蛋白质沉淀方法，该方法不会使蛋白质产生变性。 三、蛋白质的性质 Click to add title in here Click to add title in here 2 3 b.弱酸或弱碱沉淀法(等电点沉淀） 用弱酸或弱碱调节蛋白质溶液的pH处于等电点处，使蛋白质沉淀。 弱酸或弱碱沉淀法机理： 破坏蛋白质表面净电荷。 三、蛋白质的性质 Click to add title in here Click to add title in here 2 3 c.?有机溶剂沉淀法： 在蛋白质溶液中，加入能与水互溶的有机溶剂如乙醇、丙酮等，蛋白质产生沉淀。 有机溶剂沉淀法的机理： 破坏蛋白质的水化膜。 注意：有机溶液沉淀蛋白质通常在低温条件下进行，否则有机溶剂与水互溶产生的溶解热会使蛋白质产生变性。 三、蛋白质的性质 Click to add title in here Click to add title in here 2 3 （2）不可逆沉淀 定义：在强烈沉淀条件下，不仅破坏了蛋白质胶体溶液的稳定性，而且也破坏了蛋白质的结构和性质，产生的蛋白质沉淀不可能再重新溶解于水。 由于沉淀过程发生了蛋白质的结构和性质的变化，所以又称为变性沉淀。 如加热沉淀（次级键）、强酸碱沉淀（影响电荷）、重金属盐沉淀（Hg2+、 Pb2+ 、Cu2+、 Ag2+）和生物碱试剂或某些酸类沉淀等都属于不可逆沉淀。 三、蛋白质的性质 Click to add title in here Click to add title in here 2 3 d.重金属盐沉淀(条件：pH 稍大于pI为宜) 当pH 稍大于pI时，蛋白质颗粒带负电荷这样就容易与重金属离子结合成不溶性盐而沉淀。 重金属沉淀法的机理： 重金属盐加入之后，与带负电的羧基结合。 三、蛋白质的性质 Click to add title in here Click to add title in here 2 3 f.生物碱试剂沉淀法（条件：pH稍小于pI） 生物碱是植物组织中具有显著生理作用的一类含氮的