受体的放射配体基结合分析rba.pptVIP

第五节：定量RBA的数据处理 定量RBA就是通过实验求出标本中受体的数量值（RT）还可求出一些有用的参数如KD、Hill系统等。 1、单点法实验数据处理：（举例书P234-235页） 特点： a.只适于简单单位点系统 b.只能求出一个数据即RT值，不能求算KD值。 c. 需标本量少，简单易行。 d.只能在做了多点法研究的基础上进行，选择好受体与配基的比例。 2、多点法数据处理：与单点法基本相同，不同的是做一系列不同LT时的单点值，然后做饱和曲线，在此基础上用不同的数学模型进行运算，求出需要参数。 数据处理方法学及特点： 60年代：目测渐近线法。 70年代：人们采用于直线化法 常用的直线化法有：Scatchard Woolf 双倒数法（lireweaver-Burk） Hill法 这四种方法的共同缺点是： 1、横坐标均为实验测定值，误差大 2、将曲线拉直，直线上各点的误差不均匀，两端大，中间小。 3、所用的游离[L]值均为间接得来，运算中本身存在着不可刻服的误差。 后来出现了按质量作用定律的直接曲线拟合，其横坐标采用了[LT]值（固定值），其方法优于前四者。现在这些拟合均用计算机进行。 受体标本的制备及实验条件选择 1、受体标本的制备方法： a、完整细胞悬浮液 b、细胞组分分离 c、受体的增溶和纯化 2、标记配基的选择： a、要选择亲和力和特异性特别高的配基，而激动剂或拮抗剂则无关紧要 b、选择的放射性核素要比活度高，即要求高比活度的标记品。 c、标记配基的放化纯度要高。 * 受体的放射配体（基）结 合分析(RBA) 受体的经典概念及特点： 定义：受体是一种蛋白质，目前尚难用一两句话来清晰的表达，可概括如下：受体是细胞膜或细胞内的一些首先与生物活性分析（药物、毒物、神经递质、激素、抗原等）相互作用的分子。 第一节 受体的概念及特点 它们具有三个相互关联的功能： 1）识别和结合； 2）传导信号； 3）产生生物效应。 同时受体还具有如下基本特征： 1）可饱合性 2）可逆性 3）特异性 4）生理效应一致性 现代受体新概念，还需有如下补充： 1）具有蛋白的性质：强酸、强硷 2）须找到内源性配体的存在 3）具有组织专一性或特定的组织分布 4）量少但亲和力高：一般10-9M John Navport Langley(1852—1925) and paul Ehrlich(1854—1915)为这一领域的开拓者。 但这一段时间受体的研究进展甚微，其原因是一个较长的时间内，仅仅把受体看成是一种虚设的概念，只是为了适应解释某些现象的需要，并不认为需用科学的方法去证实它。 第二节 受体研究发展史 直到20年代未，Clark才予以突破，在30年代Clark提出了自已的“占领理论”学说： 1、R——L的结合是可逆的 2、所有的受体都是等价的，它对配体的亲和力都相同，受体都是独立的，当一个受体被占领时，不影响其它游离受体的亲和力。 3、生物效应与被占领受体的量成正比，全部占领时产生最大效应。 4、L只以游离和结合态存在，L不被代谢，也不与其它受体部位结合，与R结合的L只占总L的极小部分。 1956年Stephenson对Clank理论提出了三点修正： 1、只有一小部分R被占领即可产生最大反应 2、被占领的受体与所引起的反应之间并不必然地呈现线性关系 3、不同的药物在诱发同一反应的能力方面有很大差异。 60年代以前对受体的研究主要靠观察激动剂和拮抗剂的生理，药物效应。对R的研究是间接的，仅停留在宏观水平，不能对受体在Call内的分布进行定位，更无法从分子水平认识受体的本质和意义。 进入60年后有了新转机 1、RBA方法学的建立 2、CAMP第一信使的发现 3、分子生物学、分离纯化技术，单抗的引入 如：1962年发现3H—E2在子宫中浓聚是可饱和的。 1965报道3H—阿托品在小肠切片上有特异并结合，且与药理效应相关，可能是M受体。 1968年有人用3H—E2证实E受体存在于胞浆。 1970年Lefkowite证明125I—ACTH与肾上腺细胞膜R的结合量与环化酶活力呈正相关。