实验三细胞吞噬及acp染色.pptVIP

胞吞作用 （endocytosis） 通过质膜内陷形成囊泡，将外界物质裹进并输入细胞的过程。 胞饮泡和吞噬泡形成的机制完全不同 吞噬作用是生物体最古老的，也是最基本的防卫机制之一。 是很多原生动物摄取营养的方式之一，原生动物门是动物界重最低等的一类真核单细胞动物，个体由单个细胞组成。通过鞭毛、纤毛或者伪足进行吞噬营养。 多细胞动物中，只有某些特化的细胞具有吞噬作用：中性粒细胞和单核细胞的吞噬作用很强，嗜酸性粒细胞虽然游走性很强，但吞噬能力较弱。它们在防御微生物的侵染和清除衰老细胞或凋亡细胞方面具重要的意义。 溶酶体由单位膜包围，直径0.25~1μm不等。 溶酶体含有核酸酶、蛋白酶、糖苷酶、酯酶、磷酸酶和硫酸酯酶六大类50多种水解酶，最适pH在5.0，故均为酸性水解酶。 其中，酸性磷酸酶是溶酶体的标志性酶。 如何设计对照组？ 1．四膜虫呼吸需要氧气，因而在培养液中聚集在液面上方。可以对着光线观察。 2. 注意吸取四膜虫时将溶液混匀（可以用移液器吸出100ul再吹入溶液中，反复3次，注意不要吹出气泡！）。 3. 吸取四膜虫培养液100μl加入到含有2%豆奶液的离心管中，反复吹打3次混匀，盖好管盖，管盖上做本组标记，放置7分钟。（此步是让四膜虫胞饮或吞噬豆奶，激活溶酶体） 4．3000rpm 离心1分钟，谨慎取出离心管，不要晃动液体，迅速吸取上清100μl （沿离心管侧壁从上往底部吸取，小心不要搅动底部的沉淀物），将这100ul豆奶液弃入水槽。然后吸取余下100ul液体，对着底部沉淀缓慢吹打，如此反复几次，将沉淀悬浮于所剩的100ul豆奶液中。（此步是通过低速离心浓缩四膜虫，去除一半体积的豆奶后，四膜虫在余下100ul的豆奶中有较大的浓度） Introduction 详述胞吞作用（endocytosis）。 简述溶酶体的概念和生理作用。 简述酶细胞化学实验技术的原理及其实验注意点。 Materials methods 用自己的语言小结Gomori染色的方法。 Results 简述实验结果，并画图表示在显微镜下观察到的实验组标本片中的图像。选择典型的四膜虫，绘制2个细胞。 实验中有哪些方法和仪器用来计数细胞？ 讨论细胞计数仪的设计原理——库尔特原理（Coulter principle ）。 Next Topic Requirements： 所有同学课余查找相关参考书和网页，准备以上问题。 第3组同学相互讨论并做ppt准备，由1人在下次实验时做Presentation。时间约10min。 全体同学相互讨论，就各个问题进行补充，提问和完善。 请大家在实验后把桌面整理好，染色缸中液体不要倒掉；用过的枪头和小离心管都丢到废物桶中，载玻片洗干净后交到回收框中，登记显微镜使用记录本，将实验记录经助教检查后再离开! 实验三 细胞吞噬和酸性磷酸酶染色（Gomori氏法） 一、实验目的 1．通过观察四膜虫吞噬碳粒和豆奶的过程，加深对“细胞吞噬”的理解。 2．明确酸性磷酸酶(Acid phosphatase )与溶酶体的关系，理解溶酶体的生理意义。 3. 掌握酶细胞化学技术中Gomori法的原理和基本操作。 二、实验原理 1. 细胞的胞吞作用（endocytosis） 2. 溶酶体 （lysosome ） 3. 酶细胞化学 真核细胞内穿梭着各种膜性囊泡，按照运动的方向，分为两种途径： 细胞质 细胞膜 细胞质 细胞膜 endocytic pathway exocytic pathway 胞吞途径 胞吐途径 1. 细胞的胞吞作用 胞饮作用（pinocytosis）：溶液、小 吞噬作用（phagocytosis）：颗粒、大 根据形成的胞吞泡的大小和胞吞物质，胞吞分为两种类型： 胞饮泡的形成 吞噬泡的形成 Adaptor protein complex Clathrin 网格蛋白 Triskelion 三脚蛋白复合体 Dynamin HSC70、auxilin 微丝及其结合蛋白 四膜虫的吞噬活动活跃且吞噬泡易于分离，是一个研究吞噬作用的良好模型。 四膜虫又可以进行大规模廉价的培养，是实验用很好的材料。 溶酶体是普遍存在于所有动物细胞（哺乳动物的成熟红细胞除外）中的细胞器，在不同类型及不同功能的细胞内，溶酶体的数量及分布不同。 红色荧光为溶酶体显色 2. 溶酶体 （ lysosome ） 溶酶体的主要功能 溶酶体是细胞内的消化器官，细胞自溶，吞噬防御以及对某些物质的利用均与溶酶体的