实验六细菌大小的测量和放线菌的形态观察.pptVIP

实验六 细菌大小测量和放线菌、霉菌形态观察 一 实验目的 1 观察放线菌的形态特征； 2 了解根霉、青霉、毛霉及曲霉的形态构造; 3 学习测微计的校正方法；? 4 学习使用显微镜测微尺测定微生物细胞大小 。 二 实验原理 放线菌一般由分枝状菌丝组成，它的菌丝可分为基内菌丝(营养菌丝)、气生菌丝或有孢子丝三种。放线菌生长到一定阶段，大部分气生菌丝分化成孢子丝，通过横割分列的方式产生成串的分生孢子。孢子丝形态多样，有直、波曲、钩状、螺旋状、轮生等多种形态。孢子也有球形、椭圆形、杆状和瓜子状等等。它们的形态构造都是放线菌分类鉴定的重要依据。 霉菌为真核微生物，菌丝较粗大，有分枝或不分枝的。菌丝体为无色透明或暗褐色至黑色，或呈现鲜艳的颜色。在显微镜下观察时，菌丝皆呈管状。在固体培养基上生长，为绒毛状或棉絮状。一些较高等的霉菌丝状管道中皆有横隔，由横格状菌丝隔成许多细胞。细胞易收缩变形，而且孢子很容易分散，所以制标本时常用乳酸石炭酸棉蓝染色液。该染色液使细胞不变形，具有防腐杀菌作用，且不易干燥．，能保持较长时间，溶液本身呈蓝色，有一定的染色效果。 显微测微计由镜台测微计和目镜测微计两部分组成。后者可直接用于测量细胞大小。 由于目镜测微计所测量的是微生物细胞经过显微镜放大之后所成像的大小，刻度实际代表的长度随使用的目镜和物镜放大倍数及镜筒的长度而改变，所以，使用前须先用镜台测微计进行标定，求出某一放大率下，目镜测微计每一小格所代表的长度，然后用目镜测微计直接测被测对象的大小。 镜台测微尺是一块中央有精确刻玻片，刻度的总长为lmm，等分为100小格，每小格长10um，专用于对目镜测微计进行标定的。 目镜测微尺是一块圆形玻片，在玻片中央把5mm长度刻成50等分，或把10 mm长度刻成100等分。测量时，将其放在接目镜中的隔板上(此处正好与物镜放大的中间像重叠)来测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正，以求出在一定放大倍数下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。 目镜测微尺的校正 把目镜的上透镜旋下，将目镜测微尺的刻度朝下轻轻地装入目镜的隔板上，把镜台测微尺置于载物台上，刻度朝上。先用低倍镜观察，对准焦距，视野中看清镜台测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行，移动推动器，使两尺重叠，再使两尺的“0”刻度完全重合，定位后，仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度，计数两重合刻度之间目镜测微尺的格数和镜台测微尺的格数。 目镜测微尺每小格长度（um）= 两对重合线间镜台测微尺格数×10um 两对重合线间目镜测微尺格数 例如目镜测微尺5小格正好与镜台测微尺5小格重叠，已知镜台测微尺每小格为l0μm，则目镜测微尺上每小格长度为=5×10μm/5＝10μm 由于不同显微镜及附件的放大倍数不同，因此校正目镜测微尺必须针对特定的显微镜和附件（特定的物镜、目镜、镜筒长度）进行，而且只能在特定的情况下重复使用，当更换不同放大倍数的目镜或物镜时，必须重新校正目镜测微尺每一格所代表的长度。 三 实验器材 1、材料：放线菌涂片、食品霉菌 2、仪器：显微镜 、目镜测微尺、镜台测微尺等 3、试剂：美蓝、番红、香柏油、二甲苯等 四 实验步骤 （一）放线菌的形态观察 1．营养菌丝的观察 2．气生菌丝与营养菌丝的比较观察 3．孢子丝及孢子的观察 （二）霉菌制片观察 (1)于一洁净载玻片上，滴一滴美蓝溶液，用解剖针或接种钩从菌落边缘处取少量带有孢子的菌丝于染色液中，再细心地把菌丝挑散开，然后用盖玻片盖上，注意不要产生气泡。 (2)置于显微镜下，观察霉菌的形态。 ?（三）微生物菌体大小的测定 将标本先在低倍镜下找到目的物，然后在高倍镜下用目镜测微尺测定每个菌体长度和宽度所占的刻度，即可换算成菌体的长和宽。 求平均值 一般测量微生物细胞的大小，用同一放大倍数在同一标本上任意测定l0一20个菌体后，求出其平均值即可代表该菌的大小。 ?  五 实验报告及作业1 填表 通过测量将实验结果填入下列表格 物镜 目尺格数 台尺格数 目尺校正值（μm） 10× 100× ΔΔ菌大小测定记录（格） 2 思考  （1）、比较酵母菌、细菌、霉菌形态上的异同。 （2）P51 1：为什么更换不同放大倍数的目镜和物镜时，必须用镜台测微尺重新对目镜测微尺进行矫正？ （3）P51 2：在不改变目镜和目镜测微尺，而改变不同放大倍数的物镜来测定同一细菌的大小时，其测定结果是否相同？为什么？ 曲霉(Aspergillus) ◆繁殖：