免疫原和抗血清制备技术（PPT 51页）.ppt

免疫原和抗血清制备技术 第一节 免疫原的制备 第二节 免疫血清的制备 第三节 抗体的纯化和鉴定 第四节 单克隆抗体技术 混合 半抗原-载体连接方法2 戊二醛法: 半抗原-NH2 载体蛋白-NH2 半抗原-N=CH-(CH2)3-CH=NH-载体蛋白 OHC-(CH2)3-CHO *戊二醛是常用的带有两个活性基团的双 功能联接剂 半抗原-载体连接方法3 氯甲酸异丁脂法： 半抗原-COOH 载体蛋白-NH2 Cl-COO-CH2CH(CH3)2 半抗原-COO-COO-CH2CH(CH3)2 半抗原-CO-NH-载体蛋白 简便，用于类固醇抗原制备 HO-CH2CH(CH3)2 ＋ 半抗原-载体连接方法4 琥珀酸酐法：用于不含羧基衍生物半抗原制备 半抗原-CH2OH CH2-CO CH2-CO 带羧基的半抗原琥珀酸衍生物 半抗原-CH2-OOC-CH2-CH2-COOH 返回 吡啶 再经氯甲酸异丁脂法或碳化 二亚胺法制备载体半抗原 四、佐剂 * 概念：与抗原同时或预先注射于机体，能增 加机体免疫应答或改变免疫应答类型的物质。 条件：①增加抗原的表面积； ②改变抗原的活性基团构型； ③佐剂与抗原混合能延长抗原在局部 组织的存留时间； ④可直接或间接激活免疫活性细胞； ⑤无毒性或无副作用。 （二）常用佐剂的种类和制备 1.氢氧化铝佐剂： 5%硫酸铝 5%氢氧化钠 氢氧化铝沉淀 制成悬液 即为佐剂 强烈搅拌 NS洗 二次 NS 等体积抗原 免疫接种 2.明矾佐剂 10%硫酸钾铝 氢氧化钠校正pH值至6.5 沉淀 乳状悬液 * 明矾佐剂抗原常用用于肌肉注射，皮下注射 易引起肉芽种和脓肿。 NS搅拌 NS洗 二次 离心 抗原 备用 防腐剂 作用大于不完全佐剂 局部形成肉芽种和溃疡 不能用于人体 弗氏完全佐剂 3.弗氏佐剂(Freund adjuvant) 液体石蜡 完全乳化 备用 ＋ 高压 灭菌 加热 抗原 弗氏不完全佐剂 卡介苗 羊毛脂 鉴定 一滴 乳剂 乳剂不散浮于液面 水中 混合 4.佐剂应用原则和评价 目的:①增强抗原对机体的免疫原性； ②增强抗体的产生能力； ③为制备出高效价的免疫血清； ④增强可溶性抗原的免疫原性； ⑤在某种情况下，改变Ag免疫应答类型； ⑥延长抗原在免疫动物的时间； ⑦改变抗原的分布； ⑧增强局部对变应原的超敏反情况； 应用佐剂的缺点 ① 佐剂常混有微量其它物质，这些物质进 入体内后也可引起抗体的产主，影响抗 血清的特异性； ② 注射佐剂可引起局部形成肉芽肿和无菌 性脓肿； ③ 反复注射，易发生超敏反应，使局部组 织坏死，甚至引起动物死亡。 1.免疫动物选择 2.免疫方法 3.动物采血法 4.免疫血清的分离及保存 一、免疫动物选择 能作免疫接种用的动物主要是哺乳类和禽类。 兔、绵羊、豚鼠、鸡、山羊和马。 1.抗原与免疫动物种属差异越远越好； 2.动物必须适龄、健壮、无感染的正常动物、 体重合乎要求； 3.不同动物种类对同一免疫原有不同的免疫 应答； 4.按需要量选择大小不同的动物。 二、免疫方法 3.免疫方案 ①全量免疫法：弗氏佐剂抗原多次注射 ②微量免疫法：卡介苗7天弗氏佐剂1月 抗原 ③混合免疫法：综合皮下、淋巴结和静脉 1.免疫原的注射剂量 2.免疫途径：免疫反应产生速度依次为静脉＞ 腹腔＞肌肉＞皮下＞皮内＞淋巴结＞足掌 三、动物采血法 1.颈动脉放血法：最常用的方法 2.心脏采血法：要求操作熟练 3.静脉采血法： 1.4℃保存：可保存3～6个月 2.低温保存：-20～-40℃，可保存2～3年 3.冰冻干燥保存：可保存3～5年 1.抗体特异性的纯化 2.特异性IgG类抗体的纯化 3.特异性抗体的鉴定 第一节 免疫原的制备 第二节 免疫血清的制备 第三节 抗体的纯化和鉴定 更多内容欢迎莅临天马行空官方博客：/tmxk_docin 一、细胞性抗原的制备 二、可溶性抗原制备及鉴定 三、半抗原免疫原的制备 四、佐剂 绵羊红细胞的制备流程图 摇动 15-20min 4℃ 可保存3周 取适量 NS洗涤3次 2000r/min 10min NS稀