第6章 酶工程药(一).pptVIP

第六章 酶工程制药 第一节 概述酶的特性 酶是生物催化剂，大多数酶的本质是蛋白质，有些酶是核酸。 酶作为生物催化剂，除具有一般催化剂的特性：加快反应速度、降低反应活化能、不改变反应平衡点、反应前后无数量和性质变化等外，还具有独自的特点：催化效率高、专一性强、反应条件温和、催化活性易受调节和控制。 酶由国际酶学委员会分为六大类：氧化还原酶类、转移酶类、水解酶类、裂合酶类、异构酶类、合成酶类。 一、酶工程简介 酶工程（enzyme engineering）是酶学和工程学相互渗透、发展而形成的一门新的技术科学。从应用的目的出发研究酶、应用酶的特异催化功能，并通过工程化将相应原料转化成有用物质的技术。 20世纪 20年代初出现，当时主要是自然酶制剂在工业上的大规模应用，1953年提出固定化酶技术，1969年利用该技术成功拆分了混旋氨基酸。1971年第一届国际酶工程会议提出的酶工程主要内容是：酶的生产、分离、纯化、固定化、固定化的反应器、酶与固定化酶的应用。 酶工程的优点是工艺简单、效率高、生产成本低、环境污染小、产品收率高、纯度好、还可制造出化学方法无法生产的产品。 现代酶工程的研究内容： 1、酶的分离、提纯、大批量生产及新酶和酶的应用开发；2、酶和细胞的固定化及酶反应器的研究；3、酶生产中基因工程技术的应用及遗传修饰酶（突变酶）的研究；4、酶的分子改造与化学修饰、以及酶的结构与功能之间关系的研究；5、有机相中酶反应的研究；6、酶的抑制剂、开发及其应用研究；7、抗体酶、核酸酶的研究；8、模拟酶、合成酶、酶分子的人工设计、合成的研究。 二、 酶的来源 普遍存在于生物体中，可直接从生物体中分离。 化学合成方法目前还不成熟。 早期是以动植物为原料进行提取，由于动植物生长周期长、来源有限、受地理、气候和季节等因素的影响，不适于大规模生产。 利用微生物来生产酶制品是一个更好的选择，优点是：1、微生物种类繁多，动植物体内的酶在微生物中几乎都可以找到；2、繁殖快、生产周期短、培养简便、并可以通过控制培养条件来提高产量；3、微生物具有较强的适应性，通过各种遗传变异手段能培育出新的高产菌株。 三、酶的生产菌 1、对菌种的要求 ①繁殖快，产酶量高，酶的性能符合使用要求，最好是胞外酶；②不是致病菌、在系统发育上与病源体无关，不产生毒素；③稳定，不易变异退化，不易感染噬菌体；④能利用廉价原料，发酵周期短，易于培养。 2、生产菌来源 从菌种保藏机构和有关研究部门获得，从自然界中分离筛选。土壤、深海、温泉、火山、森林都是菌种采集地，筛选包括菌样采集、菌种分离、初筛、纯化、复筛、生产性能鉴定。 生产菌的改良，基因突变、基因转移、基因克隆。 3、常用产酶微生物 大肠杆菌：一般属于胞内酶，需要经过细胞破碎才能得到。谷氨酸脱羧酶，用于测定谷氨酸含量或γ-氨基丁酸；天冬氨酸酶，催化延胡索酸加氨生成L-天冬氨酸；苄青霉素酰化酶，生成新的半合成青霉素或头孢霉素；β-半乳糖苷酶，用于分解乳糖。 枯草杆菌：α-淀粉酶、蛋白酶、葡萄糖氧化酶、碱性磷酸脂酶。 青霉菌：产黄青霉用于生产葡萄糖氧化酶、青霉素酰化酶；橘青霉用于生产脂肪酶、葡萄糖氧化酶、凝乳蛋白酶。 黑曲霉：有胞外酶和胞内酶，糖化酶、α-淀粉酶、酸性蛋白酶、葡萄糖氧化酶、脂肪酶、纤维素酶。 米曲霉：糖化酶和蛋白酶，在传统的酒曲和酱油曲中得到广泛应用。 木霉：纤维素酶，含有较强的17α-羟化酶，常用于甾体转化。 根霉：糖化酶、α-淀粉酶、转化酶、酸性蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶，含有较强的11α-羟化酶，常用于甾体转化。 链霉菌：葡萄糖异构酶、青霉素酰化酶、纤维素酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶，含有丰富的11α-羟化酶，可用于甾体转化。 啤酒酵母：酿造啤酒、酒精、饮料酒和面包制造。可生产转化酶、丙酮酸脱羧酶等的生产。 植物细胞：大蒜-超氧化物歧化酶、木瓜-木瓜蛋白酶、菠萝-菠萝蛋白酶。 ※提高药用酶产量的措施 1、添加诱导物 对于诱导酶的发酵生产，在发酵培养基中添加适当的诱导物，可使产酶量显著提高。乳糖诱导β-半乳糖苷酶，纤维二糖诱导纤维素酶。 诱导物可分为三种：酶的作用底物、酶的反应产物、酶的底物类似物。 2、控制阻遏物浓度 有些酶的合成受到阻遏物的阻遏作用，应设法解除阻遏作用来提高酶的产量。 3、添加表面活性剂 可分为离子型和非离子型，离子型对细胞有毒害作用，只能使用非离子型，可聚集在细胞膜上，增加细胞通透性，有利于酶的分泌，可增加酶的产量。 4、添加刺激剂 在植物细胞培养生产次级代谢产物的过程中，添加某些刺激剂可显著提高次级代谢的物的产量。真菌的细胞壁碎片或其有效成分、微生物胞外酶以及一些小分子物质。 5、添加产酶促进剂 植酸钙镁可使霉菌蛋白酶和橘青霉磷酸二酯酶的产量提高1-20倍。 四、酶在医药领