青虾眼柄组织总RNA提取方法的比较和分析.pdfVIP

中国农学通报 2011,27(03):378-382 Chinese Agricultural Science Bulletin 青虾眼柄组织总RNA提取方法的比较和分析 1 1,2 1 2 2 2 2 王 宁 ，傅洪拓 ，乔 慧 ，吴 滟 ，龚永生 ，蒋速飞 ，熊贻伟 1 2 （南京农业大学无锡渔业学院，江苏无锡214081 ；中国水产科学研究院淡水渔业研究中心， 农业部水生动物遗传育种和养殖生物学重点开放实验室，江苏无锡214081 ） 摘 要：为了找到最适合青虾眼柄总RNA 抽提的方法，本试验先后使用RNAiso Plus 、RNeasy Mini Kit 、 Unizol 等产品抽提青虾眼柄总RNA 并在方法上进行了改良，通过电泳、紫外分光光度计和RT-PCR 对总 RNA 进行检测和分析。结果表明RNAiso 法抽提的RNA 色素含量高；改良RNAiso 法抽提的RNA 有部 分降解，含色素少，对反转录酶有一定的抑制作用但不影响RT-PCR ；RNeasy Mini Kit 能有效去除抑制反 转录酶活性的色素且RNA 无降解，但DNA 污染严重；RNAiso 结合RNeasy Mini Kit 法和Unizol 结合 RNeasy Mini Kit 法提取的RNA 均无DNA 污染，也没有抑制反转录酶活性的色素，但后者所提的RNA 完整性好。因此，Unizol 结合RNeasy Mini Kit 法最适合青虾眼柄总RNA 的提取，可获得高质量的RNA 用于RT-PCR 、cDNA 文库构建、定量PCR 等实验。 关键词：青虾；眼柄；RNA 提取 中图分类号：Q522 ，S917.4 文献标志码：A 论文编号：2010-2798 ComparisonandAnalysisofExtractionMethodsofTotalRNAfrom theEyestalkinMacrobrachiumnipponense 1 1,2 1 2 2 2 2 Wang Ning , Fu Hongtuo , Qiao Hui , Wu Yan , Gong Yongsheng , Jiang Sufei , Xiong Yiwei 1 ( WuxiFisherycollege,NanjingAgriculturalUniversity, Wuxi Jiangsu 214081; 2FreshwaterFisheryResearchCenter,ChineseAcademyofFisheryScience,KeyOpenLaboratoryforGeneticBreedingofAquatic AnimalsandAquacultureBiology,MinistryofAgriculture,Wuxi Jiangsu 214081） Abstract: In this paper, eyestalks of Macrobrachium nipponense were studied as the material for seeking the best extraction method of total RNA by using RNAiso Plus, RNeasy Mini Kit, Uniz