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HLAB27分子与分子伴侣的相关性研究

HLA-B27分子与分子伴侣的相关性研究 2010-02-22 黄烽 余得恩   【摘要】 目的 观察HLA-B27分子与Calnexin及BiP两种分子伴侣的相关,了解HLA分子在人体细胞内的合成、组装及转运过程。方法 将人HLA-B27基因转入人B淋巴母细胞系C1R,以单克隆抗体、免疫沉淀、脉冲追踪及内切糖苷酶H消化实验判断B27分子在细胞内的成熟过程,及B27分子与两种分子伴侣之间的相关性。结果 C1R细胞在加入培养基30分钟时已开始将新合成的B27分子从内质网转运到高尔基体,2小时后所有新合成的B27分子完成在高尔基体内的修饰过程,并被转运到细胞表面。结论 Calnexin及BiP均参与B27分子在细胞内的组装过程,主要与新生态的分子结合。本研究为今后探讨B27与强直性脊柱炎的相关、寻找早期诊断与早期治疗措施提供理论依据。   【关键词】 HLA-B27分子  分子伴侣  细胞生物学 The assembly and transportation of HLA-B27 molecule and its relationship with molecular chaperone calnexin and BiP  HUANG Feng,YU Deen.PLA General Hospital,Beijing 100853   【Abstract】 Objective To investigate the cell biology of HLA-B27 molecule and its association with molecular chaperones calnexin and BiP.Methods Human HLA-B27 gene cDNA was transfected into mutant human B cell line,C1R.Using monoclonal antibodies,immunoprecipitation,pulse chase and endoglycosidase H digestion experiment,the expression,assembly and transportation of B27 molecules were studied.The associations of B27 molecule with calnexin and BiP were also studied.Results The results showed that the C1R cells start to synthesize B27 molecules right after the addition of culture medium.About 30 minutes later,some nascent B27 heavy chains already completed their glycosylation in the Golgi apparatus and became endo H resistant.The whole maturation process took about 2 hours.Conclusion The association of calnexin and BiP with B27 was mainly with nascent B27 molecules.The understanding of the cell biology of B27 in human cells plays an important role in future studies such as how bacteria infection influences the assembly and expression of surface and soluble B27 molecules.   【Key words】 HLA-B27 molecules  Molecular chaperone  Cell biology    HLA-B27是已知的与人类疾病相关最密切的HLA基因,研究发现携带B27基因者患强直性脊柱炎的机率是无B27基因者的100倍~150倍。尽管发现B27与疾病的相关已近30年,对B27在人细胞内的合成、组装及转运过程国内外文献均未见报道。本研究以单克隆抗体、免疫沉淀、脉冲追踪及内切糖苷酶H消化实验观察B27分子如何与Calnexin及BiP这两种分子伴侣相关,并了解B27分子在人细胞系内的合成、组装与转运过程。 1 材料与方法 1.1 基因克隆:人HLA-B27基因及真核表达载体〔1〕RSV.5neo由美国华盛顿大学

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