不同剂量环磷酰胺对小鼠体重和精子畸形影响.docVIP

不同剂量环磷酰胺对小鼠体重和精子畸形影响 探讨不同剂量的环磷酰胺（CP）对小鼠体重和精子畸形的影响。方法 将雄性昆明种小鼠随机分成阴性对照组和不同剂量环磷酰胺试验组, 经口连续灌胃5d，正常饲养到35d解剖动物，观察各试验组小鼠体重、精子畸形和精子数量的变化。结果 连续灌胃5d后，CP各组小鼠的体重与对照组比较均减轻（F=205.06，P＜0.01）；CP剂量越大，小鼠体重减轻越多。CP剂量越大，小鼠精子数量减少越多，CP60mg /kg.BW剂量组为最少，与空白对照组比较，差异有统计学意义（F=39.71，P＜0.01）。CP30mg /kg.BW以上剂量组均可引起精子畸形数量增加 ,随着剂量加大 ,畸形精子数越多 。30与40mg/kg.BW组的精子畸形率与对照组差异有统计学意义(F=51.24，P＜0.01)。结论 CP 40mg/kg.BW以上剂量组，可使小鼠体重明显减轻、精子数量明显减少。 精子畸形试验是检测环境因子对精子生成、发育的影响，也是检测雄性生殖细胞遗传毒性的重要试验之一。用《食品安全性毒理学评价程序和方法 GB 15193.7—2003》[1]和《保健食品检验与评价技术规范 （2003年版）》[2]中的精子畸形试验方法，探讨CP对小鼠体重、精子畸形和精子数量的影响。 1. 材料和方法 1.1材料 雄性昆明种小鼠由四川省中医药科学院实验动物中心提供，生产许可证号：SCXK（川）2008-19.SPF级。环磷酰胺由江苏恒瑞医药股份有限公司提供批号 1.2方法 环磷酰胺设10mg/kg.BW、20mg/kg.BW、30mg/kg.BW、40mg/kg.BW、60mg/kg.BW5个剂量组，另设蒸馏水对照组,每组昆明种小鼠10只；按20ml/kg.BW,连续5d经口灌胃给予受试物后，正常饲养到35d解剖动物；观察环磷酰胺对小鼠体重和精子畸形率的影响。参照国家标准取两侧附睾作精子涂片镜检 ,观察小鼠精子畸形的变化以及显微镜（20×10倍）100个视野中精子数量的变化。 1.3统计 用SPSS 11.0统计软件作数据的方差分析。 2. 结果 2.1环磷酰胺对小鼠体重的影响 首次灌胃时，空白对照组与环磷酰胺各剂量组之间的小鼠体重没有差异（F=0.39，P＞0.05）；末次灌胃时，空白对照组的体重明显重于各环磷酰胺组（F=205.06，P＜0.01）；环磷酰胺各组的体重，依剂量增加而体重减轻，见表1。 2.2环磷酰胺对精子数量的影响 使用环磷酰胺从10mg到60 mg/kg.BW灌胃，各组涂片中的精子数量，随着剂量增加而减少。剂量60mg/kg.BW组，涂片中的精子数量最少，1张涂片上不足1000条精子，与空白对照组比较，差异有统计学意义（F=39.71，P＜0.01），见表1。 3. 讨论 精原细胞后期或初级精母细胞早期的生殖细胞对化学诱变剂较敏感。一般在接触诱变剂后第5周最易出现精子畸形或畸形率增高。 我国食品安全性毒理学评价程序、化妆品安全性评价程序和工业毒理学中均将小鼠精子畸形试验作为遗传毒性的主要检测指标。参照现行的精子畸形实验国家标准进行了一系列的样品检测[3~5]，并在此基础上对国家标准方法进行了进一步的探讨[6~7]。 环磷酰胺作为精子畸形试验的阳性对照[8]，随着CP剂量加大 ,小鼠体重逐渐减轻、涂片上每个视野的畸形精子数也随之减少、精子畸形率逐渐增加[9~10]。从本实验结果提示，在精子畸形试验中的阳性对照，CP的剂量选在40mg/kg.BW最为恰当。达到60mg/kg.BW时，精子数量太少，增加了在实际操作中计数畸形精子率的难度。在精子畸形试验中，首次灌胃与末次灌胃小鼠体重的变化较大。如果采用首次灌胃时的小鼠体重用于末次灌胃的剂量参考，则可能给予小鼠的CP剂量过大，导致精子数量急剧减少，影响阳性对照的不稳定或失败。虽然小鼠体重的减轻与是否导致小鼠精子畸形没有必然的联系，但在试验中可以提示，该检测样品需要引起足够的重视。