细胞系与细胞克隆研究生教学课件.pptVIP

教学目的： 1、掌握传代培养的概念和方法 2、了解细胞系的建立过程 3、掌握克隆细胞的几种方法 细胞系cell line：原代培养物经首次传代后即成。 有限细胞系finite cell line: 不能继续传代或传代数有限。 连续细胞系continuous cell line：可连续传代的细胞系，即已建成的细胞系。 细胞株cell strain：通过选择法和克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质和标志的培养物。 一、传代培养（passage） 概念：无论是否稀释，将细胞从一个培养瓶转移或移植到另一个培养瓶。 （一）传代培养的方法 1、从生长器皿上解离细胞的方法： 1）震荡法。 2）胰蛋白酶消化法 3）胰蛋白酶-柠檬酸盐 4）用EDTA洗细胞再用胰蛋白酶-柠檬酸盐处理 5） EDTA洗再用胰蛋白酶-EDTA消化 6） EDTA洗再用胰蛋白酶-胶原酶配合柠檬酸盐或 EDTA消化 7）机械刮削法（scraping） 8）分散酶（0.1mg/ml)或蛋白酶(0.1-1.0 1mg/ml) 2.单层培养细胞的一般传代步骤: 倒出旧液 PBS洗涤 胰蛋白酶消化 吸出消化液 加入培养液 吹散细胞 计数 稀释 培养 离心法：离心后去上清，加培养液，吹 打，传代。 直接传代法：将细胞慢慢沉淀，将上清吸去1/2-2/3，