微生物的分离和纯培养.pptVIP

微生物纯种分离 单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，称为菌落(colony)。 （二）、纯种平板分离的不同方法 分区划线法（蛇形线法）操作图 连续划线法操作图 二、用液体培养基分离纯化培养 个别细胞较大的细菌 原生动物、藻类 三、单细胞（单孢子）分离 采用显微分离法从混杂群体中直接分离单个细胞或单个个体进行培养以得到纯培养，称为单细胞（单孢子）分离法。 四、选择培养分离 创造适于目的微生物生长条件 六、无菌技术 在分离、转接及培养纯培养物时防止其被其他微生物污染的技术称为无菌技术。它是微生物研究进行的关键。 七、微生物的保藏技术 菌种保藏的原理： 根据菌种特性及保藏目的的不同，给微生物菌株以特定的条件，使其存活而得以延续。例如干燥、低温、缺氧、避光、缺乏营养等条件，使菌株的代谢水平降低，乃至完全停止，达到半休眠或完全休眠的状态。 传代培养保藏 冷冻保藏 干燥保藏 纸片保藏 薄膜保藏 寄主保藏 标准菌株的保存使用 1. 长期保存的储存菌株以冷冻干燥保藏为主，特殊要求的菌种可用其它方法进行保存，保存期可长达几年至几十年。2.半储存菌株以含20%甘油的肉汤或液体石腊封存的半固体琼脂为主，在0℃以下保存，保存期为3－6个月。3.应用菌株以琼脂斜面为主，在4℃保存，保存期为1－3个月。4.菌种的传代不可超过6次。视菌种的特性及使用情况，一般储存菌株每5年传记代一次，每1-2年从储存菌株转接至半储存菌株，半储存菌株每3-6个月传代一次，每1-3个月从半储存菌株转接接至应用菌株。5.每次检验用的菌株必须是从应用菌株转接的新鲜菌株。每支应用菌株用两次后必须销毁（121℃，0.1MPa高压灭菌处理15分钟以上）。 国内外菌种保藏部分情况 我国于1979年7月成立了中国微生物菌种保藏管理委员会(CCCCM).该委员会下设6个菌种保藏管理中心,其负责单位、代号及保藏菌种的性质如下: 作业 1、名词解释：无菌技术、单细胞分离 2、一般可用哪些方法获得微生物的纯培养物？ 如果培养物中只含有两种微生物，而且是有意识的保持两者之间的特定关系的培养物称为二元培养物。 五、二元培养物 病毒和宿主细胞 纤毛虫、变形虫和粘细菌 微生物纯培养分离方法的比较 即可定义,又可定量,用途广泛 用得最多 方法简便,多用于分离细菌 主要分离严格厌氧菌 适用于培养细胞较大的微生物 局限于高等专业化的科学研究 适用于分离某些生理类型较特殊的微生物 稀释倒平板法涂布平板法 平板划线法 稀释摇管法 液体稀释法 单细胞分离法 选择培养分离 应用范围 方法 用于分离、培养微生物的器具事先不含任何微生物 在转接、培养微生物时防止其他微生物的污染 1、所用物品的灭菌技术 A、玻璃或金属器皿灭菌 高温干热灭菌：干燥箱 160－170℃干热空气2h灭菌 湿热灭菌：高压蒸汽灭菌锅 121℃湿热灭菌30min B、培养基或溶液的灭菌 湿热灭菌：高压蒸汽灭菌锅 121℃湿热灭菌30min C、血清或生长因子溶液灭菌 过滤除菌：细菌滤器 滤膜孔径小于细菌细胞的大小 上节课知识回顾 二、无菌技术 单孢子分离 选择培养分离 二元培养物 一、微生物分离纯化方法 1、所用物品的灭菌技术 玻璃或金属器皿灭菌 培养基或溶液灭菌 血清或生长因子灭菌 2、接种 接种:将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种. 无菌接种:培养基经高压灭菌后，用经过灭菌的工具在无菌条件下将含菌材料接种于培养基上，这个过程叫做无菌接种。 1.接种针 2.接种环 3.接种钩 4.接种锄 5.接种铲　6.接种匙 7.接种刀 8.接种刀　9.剪刀　10.钢钩　 11.镊子 12.弹簧接种枪　13.接种、枪（日本式） 涂布棒 弹簧接种枪 接种环的灭菌 接种环烧红 接种环稍冷却 接种工具 挑选单个菌落 划线 1、实验台 2、空气 环境条件 微生物菌株保藏的方法： 传代保藏 斜面、半固体琼脂柱、液体 传代培养保藏 斜面：可保存数周至数年，可用石蜡或橡皮塞封口，低 温延长保存时间 液体：菌苔制成菌悬液，低温（悬液保藏法） 缺点：繁琐、易污染、变异丧生原有特性 冷冻保藏 液氮保藏、低温冰箱等 液氮可达－196℃，效果较好 注意：速冻，减少冰晶损伤细胞 冷冻保藏法 细胞体积大的要比体积小的对低温更敏感；无细胞壁的比有细胞壁的更敏感。 干燥保藏 沙土管保藏、冷冻真空干燥 保藏 沙土管：产孢子菌。制成孢子悬液，加无菌沙土管，减压抽干水分，石蜡封口，冰箱保存。 冷冻真空干燥：加保护剂样品预先冷冻，真空冰升华去水，低温保存，保存数十年，目前最普遍、最重要的方法，菌种保藏中心多采用