离心机-研究生10.pptVIP

分离分析仪器 引 言 离心现象是指物体在离心力场中表现的沉降现象。 引 言 生物学领域：分离出化学反应后的沉淀物，天然的生物大分子、无机物、有机物。 医学领域：主要用于分离、纯化细胞、病毒、蛋白质、酶和核酸。 第一节离心机的工作原理 一、圆周运动与离心现象 向心力：做圆周运动的物体所受的外力的合力。它的大小取决于外力的大小，方向是与速度的方向垂直，指向圆心。 一、圆周运动与离心现象 扩散现象： 重力场中扩散现象是无条件的，绝对的。特别是对于病毒和蛋白质类小分子物质，扩散对物质的沉降影响更大。如何克服？ 相对离心力场是离心力场与重力场的比值，即R.C.F.的值表示离心力场相对于多少个g。 第二节常用的离心方法 特点 介质的密度均一； 速度由低向高，逐级离心； 分辨率不高。 二、密度梯度离心 (isodensity centrifugation) 二、密度梯度离心 (isodensity centrifugation) 二、密度梯度离心 (isodensity centrifugation) ① 分离效果好，可一次获得较纯颗粒。 ② 适应范围广，能象差速离心法一样分离具有沉降系数差的颗粒，又能分离有一定浮力密度差的颗粒。 ③ 颗粒不会挤压变形，能保持颗粒活性。 （1）速率区带离心法  (velocity sedimentation) （1）速率区带离心法  (velocity sedimentation) 分离密度相近而沉降速度不等的细胞或细胞器。 （2）等密度离心法  (isopycnic sedimentation) 操作注意事项 预先配置介质的密度梯度溶液，将介质和预分离样品混合或者是置于梯度溶液顶部，这也是等密度区带离心法产生梯度的两种方法。 离心所需时间以最小颗粒到达等密度点（即平衡点）的时间为基准，有时长达数日。一旦达到了平衡，再延长离心时间也不能改变粒子的成带位置。 例如： （1） 用注射器和滴管由离心管上部吸出。（2） 有针刺穿离心管底部滴出。（3）?用针刺穿离心管区带部份的管壁，把样品 区带抽出。（4）用一根细管插入离心管底，泵入超过梯度介质最大密度的取代液，将样品和梯度介质压出，用自动部分收集器收集。 三、分析离心法 分析性离心法：是为了研究生物大分子的沉降特性和结构的一种离心方法。因此它使用了特殊的转子和检测手段，以便连续监视物质在一个离心场中的沉降过程，从而确定其物理性质。 三、分析离心法 沉降速度法：主要用于样品纯度检查。 沉降平衡法：常用的测量绝对分子量的方法。 等密度区带分析离心法：主要用在核酸的分析和研究中。 四、离心机的分类与结构 普通离心机：最大转速6000rpm左右，容量为几十毫升至几升。转子有角式和外摆式，其转速不能严格控制，通常不带冷冻系统，于室温下操作，用于收集易沉降的大颗粒物质，如红血球、酵母细胞等。 四、离心机的分类与结构 高速离心机：最大转速为20000～25000rpm，最大容量可达3升。转头多样。一般都有制冷系统，以消除高速旋转转头与空气之间摩擦而产生的热量，离心室的温度可以调节和维持在0～40C。通常用于微生物菌体、细胞碎片、大细胞器、免疫沉淀物等的分离纯化工作，但不能有效地沉降病毒、小细胞器(如核蛋白体)或单个分子。 四、离心机的分类与结构 超速离心机：转速可达50000～80000rpm，相对离心力最大可达510000g，离心容量由几十毫升至两升，设有冷冻系统、真空系统和安全保护系统。分离的形式是速率区带离心和等密度区带离心。最著名的生产厂商有美国的贝克曼公司和日本的日立公司等。 普通离心机：电动机、离心转盘（转头）、调速器、离心套管与底座。 高速、超速（冷冻）离心机：驱动电机、制冷系统、真空系统（超离有）、显示系统、自动保护系统和控制系统组成。必要的配件为离心转头和离心管。??????? （1）离心转头 角式转头：角式转头是指离心管腔与转轴成一定倾角的转头。 荡平式转头：这种转头是由吊着的4或6个自由活动的吊桶（离心套管）构成。 垂直转头：其离心管是垂直放置。 区带转头：区带转头无离心管，主要由一个转子桶和可旋开的顶盖组成。 连续流动转头：可用于大量培养液或提取液的浓缩与分离，转头与区带转头类似。 （1）离心转头 离心转头的注意事项 1.每个转头各有其最高允许转速和使用累积限时，使用转头时要查阅说明书，不得过速使用。每一转头都要有一份使用档案，记录累积的使用时间，若超过了该转头的最高使用限时，则须按规定降速使用。