中护微生物-实验4免疫学试验.pptVIP

实验四 免疫学试验 一、吞噬细胞的吞噬作用（示教） 实验内容 中性粒细胞的吞噬作用（体内法） 非特异性免疫：是机体在种系进化过程中逐渐建立起来的一系列天然防御功能,是经遗传获得，能传给下一代。包括： （一）中性粒细胞的吞噬作用： 实验前1小时小鼠腹腔内注射1ml无菌肉汤 镜下可见： 中性粒细胞的细胞核染成深紫红色，细胞浆染成淡粉红色，白色葡萄球菌染成深紫色。如图 （二）巨噬细胞的吞噬作用： 前三天给小鼠腹腔内注射淀粉肉汤1ml 镜下可见： 巨噬细胞核大，呈椭圆形、肾形或马蹄形。核染色质比较疏松，染成淡紫色，胞浆染成浅灰蓝色。发生吞噬时可见在巨噬细胞胞浆中有一个以上的有核鸡红细胞。如吞噬的鸡红细胞多时则巨噬细胞核被挤到一侧，形态不规则。如图所示 瑞氏染色法： 于玻片上滴加瑞氏染液1-2滴染色1min 滴加4-5滴蒸馏水于玻片上，混匀染色液，染5~10min 流水冲洗，待干后用油镜观察 二、抗原-抗体反应 （一）凝 集 反 应 实验原理 颗粒性抗原（细菌、细胞等）与相应的抗体在体外结合，在一定的条件下，形成肉眼可见凝集小块的反应，称为凝集反应。参与反应的抗原称为凝集原，抗体称为凝集素。 实 验 方 法 直接凝集反应：颗粒性抗原与相应抗体直接结合，所出现的凝集现象，包括试管凝集反应、玻片凝集反应。 间接凝集反应：将可溶性抗原（或抗体）吸附在与免疫无关的载体颗粒表面，使此颗粒致敏（或称免疫球），然后再与相应抗体（或抗原）混合，在适当条件下，发生凝集现象，称为间接凝集反应或被动凝集反应。 1.玻片凝集反应 原理：已知抗血清与未知颗粒性抗原置于清洁玻片上，在有电解质存在的条件下，若两者相对应，则会发生凝集，在澄清的液体中出现明显的凝集块。 主要用途：抗原的定性分析，如菌种鉴定、分型及血型的鉴定。 玻片凝集反应—ABO血型鉴定的方法 取加有抗A血清与抗B血清载玻片1张 红细胞悬液的制备 取试管一支分装生理盐水0.5ml 消毒耳垂或手指尖皮肤 用采血针采1—2滴血，加入盛有生理盐水的小 试管中混匀（待测的抗原） 用毛细吸管吸取待测的抗原各一滴于抗A、抗B血清内，分别用牙签研磨均匀 置室温于5分钟左右观察结果 实验材料 1.抗体：1:10 稀释的伤寒杆菌“ H ”免疫血清。 2.菌液 ：伤寒杆菌“ H ”菌液。 3.生理盐水、 5ml 吸管、 1ml 吸管、小试管、小试管架、水浴箱等。 试管凝集反应的方法 结 果 观 察 试管凝集 各管出现不同程度的凝集现象： ＋＋＋＋ 液体澄清，细菌全部凝集，沉于管底形成 大片凝集物。 ＋＋＋ 液体基本澄清，细菌大部分凝集，管底的 凝集物稍小。 ＋＋ 液体半澄清，稍显浑浊，但仍可见明显 凝集块。 － 液体浑浊，无凝集块，轻摇试管，有细菌 呈线状浮起。 结 果 观 察 思考题 根据试管凝集反应的结果，一份免疫血清的效价是 1:320 ，另一份是 1:1280 ，哪一份免疫血清中抗体的含量高？ （二）沉淀反应 实验原理 可溶性抗原（细菌培养滤液、血清蛋白、组织浸出液等）与特异性抗体在体外结合，在一定条件下，出现肉眼可见的沉淀现象，称为沉淀反应。参与反应的抗原称为沉淀原，抗体称为沉淀素。 1.环状沉淀反应 方法： （1）加入已知抗血清 （2）加待测抗原于抗血清层上面 （3）置室温15分钟 结果：阳性-白色沉淀环 定性试验 步 骤： 取3支沉淀小管 每管加入适量抗人血清 分别加入人血清、牛血清、N.S 静置3—5分钟，观察结果 2.单向琼脂扩散 抗原在含抗体的生理盐水琼脂介质中扩散的一种方法。 结果：孔周围形成白色沉淀环 （1）基本原理 在含有特异抗体的琼脂板中打孔，并在孔中加入定量的抗原，当抗原向周围扩散后与琼脂中抗体相结合，即形成白色沉淀环，其直径或面积与抗原浓度呈正相关。同时用标准抗原或国际参考蛋白制成标准曲线，即可用以定量检测未知标本的抗原浓度(mg/ml 或U/ml)。 应用这一实验方法可检测正常人群或患者血清中IgG、IgA 及IgM的水平。 （2）实验材料 2%离子琼脂或生理盐水琼脂（采用0.9%的生理盐水, 内含0.1% NaN3）。 标准马抗人IgG血清（抗体）（北京生物制品研究所生产） 工作标准参考蛋白（北京生物制品研究所生产） PBS （pH7.2，0.01M）. 打孔器（孔径3mm）及打孔模板