生物制药第十五章生物制品.pptVIP

细胞融合后，可产生多种融合细胞，如脾一脾、脾一瘤、瘤一瘤的融合细胞，而且还有许多未融合的骨髓瘤细胞。 可再将融合后的细胞立即移人选择性培养基中进行培养。常用的选择培养基为HAT培养基，它是用次黄嘌呤（H）、氨基蝶呤（A）和胸腺嘧啶（T）配制的。 脾一瘤融合的杂交瘤细胞可利用HGPRT酶，用次黄嘌岭（H）和胸腺嘧啶（T）合成DNA，使杂交瘤细胞得以生长。筛选出产生抗体的阳性克隆。 第三节 生物制品的一般制备方法 一、疫苗制造方法 （一）毒种的选择和减毒 （1）毒种必须持有特定的抗原性，能使机体诱发特定的免疫力。 （2）毒种应有典型的形态和感染特定组织的特性，并在传代过程中，能长期保持其生物学特性。 （3）毒种易在特定的组织中大量繁殖。 （4）不产生神经毒素或能引起机体损害的其它毒素。 （5）无原致病力的现象。 （6）不被其他病毒所污染。 （二）病毒的繁殖 所有动物病毒，只能在活细胞中繁殖。若需大量繁殖，首先要寻找能受感染的活细胞。在通常的情况下，病毒可用下列几种方法繁殖。 1、动物培养 这种方法是将病毒接种动物的鼻腔、腹腔、脑腔或皮下，使之在相应的细胞内繁殖。接种动物的种类、年龄和接种途径依病毒的种类而异。 2、鸡胚培养 这种方法是将病毒接种到7～14日龄鸡胚的尿囊腔、卵黄囊或绒毛尿囊膜等处；接种的部位亦因病毒种类的不同各异。 3、组织培养 从20世纪50年代开始，组织培养已广泛用于病毒培养。目前，差不多所有人类和动物的组织都能在试管中培养。 4、细胞培养 用于疫苗生产的主要有原代细胞培养和传代细胞培养两种方法。 原代细胞培养系将动物组织进行一次培养而不再传代；常用的细胞有猴肾细胞、地鼠肾细胞和鸡胚细胞等。 传代细胞培养系用长期传代的细胞株，常用的有人胚肺二倍体细胞、非洲绿猴肺细胞等。 （三）疫苗的灭活 不同的疫苗，其灭活的方法不同，有的用甲醛溶液 ;有的则用酚溶液 ;灭活温度和时间，需视病毒的生物学性质和热稳定性质而定。 其原则是要以足够高的温度和足够长的时间破坏疫苗的毒力，而以尽可能的最低温度和最短时间来尽量减少疫苗免疫力的损失。 （四）疫苗的纯化 疫苗纯化的目的，是去除存在的动物组织，降低疫苗接种后可能引起的不良反应。用细胞培养所获得的疫苗，动物组织量少一下般不需特殊的纯化，但在细胞培养的过程中，得用换液的方法除去培养基中的牛血清。用动物组织所制成的疫苗 （要淘汰） （五）冻干 二、菌苗类制品和类毒素的制造方法 菌苗类制品和类毒素的制备，均由细菌培养开始，但前者系用菌体作为进一步加工的对象，而后者则对细菌所分泌的外毒素进行加工。 一般工艺流程： 第四节 生物制品的质量检定 一、理化性质检定 生物制品中的某些有效成分和不利因素，需要通过物理化学和生物化学的方法才能检查出来，这是保证制品安全和有效的一个重要方面。 （－）物理性状的检查 （1）外观 （2）真空度及溶解速度 （3）装量 （二）蛋白质含量测定 目前常用的有以下4种①凯氏定氮法，②双缩脲法，｜⑧酚试剂法（Lowry氏法），④紫外吸收法。 （三）纯度检查及鉴别试验 血液制品、抗毒素和类毒素等制品，需要进行纯度检查或做鉴别试验，为此，常用区带电泳、免疫电泳、凝胶层析、超速离心等技术进行分析。 （四）分子量或分子大小测定 （五）防腐剂含量测定 生物制品在制造过程中，为了脱毒、灭活或防止杂菌污染，常加入苯酚、甲醛、氯仿、硫柳汞等试剂作为防腐剂或灭活剂。 二、安全试验 预防或治疗用生物制品，在生产过程中须进行安全性方面的系统检查，排除可能存在的不安全因素，以保证制品用于人体时不致引起严重反应或意外问题。 一般要求抓好以下几个方面： 一是菌毒种或主要原材料的检查。 二是半成品（包括原液）的检查。 三是成品检查 。 （一）外源性污染的检查 （1）野毒检查 （2）热原质试验 （3）乙型肝炎表面抗原（HBsAg）检查 （二）杀菌、灭活和脱毒情况的检查 （1）无菌试验 （2）活毒检查 （3）解毒试验 （三）残余毒力和毒性物质的检查 （1）残余毒力试验 （2）无毒性试验（一般安全试验 ） （3）毒性试验 （4）防腐剂试验 （四）过敏性物质的检查 （1）过敏性试验（变态反应试验） （2）牛血含量的测定 （3）血型物质的检测 三、效力试验 生物制品的效力，从实验室检定来讲，一是指制品中有效成分的含量水平，二是指制品在机体中建立自动免疫或被动免疫后所引起的抗感染作用的能力。对于诊断用品，其效力则表现在诊断试验的特异性和敏感性 。 （一）免疫力试验 将制品对动物进行