杂交与PCR.pptVIP

* DNA的合成是由RNA引导的半不连续的 双链DNA的两个链的反平行结构给复制带来了一个问题。当复制叉前进的时候，子链必须在两条露出的单的亲链上合成。复制叉在一条链上沿着5’-3’的方向延伸，而在另一条链上沿着3’-5’的方向延伸。但是核酸只能沿着5’-3’的方向合成。这个问题是通过从一系列短小的片段合成3’-5’的那条链，而实际上每一个短的片段是按照反的方向合成的，也就是按照传统上的5’-3’的方向合成的。 考虑到紧跟着复制叉后面的一个区域，如图15.5所示。我们可以用新生成的链的不同的性质来描述这一个过程。 l???????? 在前导链上，随着亲链的解旋，DNA沿着5’-3’的方向连续的合成。 在后随链上，一段单链的亲链DNA必须被露出，然后一个片段会沿着（相对于复制叉的运动方向）相反的方向合成。一系列这样的片段被合成，每一个都是沿着5’-3’的方向；然后它们被连接在一起，形成一个完整的后随链。 Consider the region immediately behind the replication fork, as illustrated in Figure 13.9. We describe events in terms of the different properties of each of the newly synthesized strands * The conversion of X174 double-stranded DNA into individual single strands illustrates the features of the process. Figure 13.10 shows that a single strand is peeled off the circular strand, resembling the rolling circle described previously in Figure 12.16. The reaction can occur in the absence of DNA synthesis when the appropriate 3 proteins are provided in vitro. * All prokaryotic and eukaryotic DNA polymerases share the same fundamental type of synthetic activity. Each can extend a DNA chain by adding nucleotides one at a time to a 3OH end, as illustrated diagrammatically in Figure 13.3. The choice of the nucleotide to add to the chain is dictated by base pairing with the template strand. DNA聚合酶：制造DNA的酶 一个能够在模版链上合成新的DNA链的酶叫做DNA聚合酶。原核和真核生物中都包含有多种DNA聚合酶的活动。只有它们中的一部分是真正参与了复制的；有的时候这些酶叫做DNA复制酶。其它的一些扮演了复制过程中的辅助角色并且或者参与了替换被破坏的序列的DNA合成的修复工作。 按照DNA聚合酶的方式考虑DNA的合成的过程很方便；但是讨论DNA复制酶是否是作为一个离散的个体存在的是没有实际意义的。（我们在11章中对RNA聚合酶考虑到了同样的问题。）细菌DNA复制酶的行为可以由一个包含多个亚基的聚合体恢复。无法说清到底是哪一个亚基可以被当作复制酶组成成分本身，而哪些又组成了辅助的因子。DNA合成的过程只是与复制体相关的几个功能中间的一个。也许我们不应该因为我们能够测试它在总的过程中的某一个特殊步骤而被过度的影响以致把它当作一个单独的功能去考虑。 在大肠杆菌中已经有三种聚合酶被确认。DNA聚合酶I在半保留复制中起一个辅助的作用，涉及到修复被破坏的DNA。DNA聚合酶II同样隐含有修复的作用。DNA聚合酶III，一个多亚基的蛋白质，是负责全程合成新的DNA链的复制酶， 所有的原核和真核生物的聚合酶都具有同样的合成行为的基本类型。每一个都可以通过在3-OH端一次加入一个核苷延伸DNA链，就像在图15.1中图解表现的一样。加入链中的核苷是通过和模版DNA的碱基配对来选择的。 图15.1：综述：DNA合成是通过在3-OH端加入核苷酸增长链，所以新的链是以5-3的方向合成的。DNA合成的前导体是一个核苷三磷酸，它会在反应中丧失两个末端的磷酸。 * Figure 13.4 s