消化时间对兔纤维环细胞生物学特性影响的实验研究.pdf

西部 医学 2017年 2月 第29卷第 2期 MedJWestChina，February2017，Vo1．29，No．2 · 163 · · 论著 · 消化时间对兔纤维环细胞生物学特性影响的实验研究* 杨飞 。 肖东琴 冯刚 刘康。 向一J、聪 邓丽 (1．西南医科大学 ，四川 泸州 646000；2．南充市中心医院 ·川I北医学 院第二临床 医学 院组织工程与干细胞研究所 ，四川 南充 637000) 【摘要】 目的 探索兔纤维环细胞分离培养 的最佳消化时间及不 同消化时间对细胞生物特性的影响。方法 将 2O只新西兰大白兔随机均分为 A、B、C、D、E组 ，空气栓死并取其纤维环组织 ，采用胰 蛋 白酶和 Ⅱ型胶原酶序贯消化法 分离纤维环细胞 ，A、B、C、D、E组 Ⅱ型胶原酶消化的时间分别为 1、2、3、4、5h，获取的细胞用DMEM培养基进行培养 。 通过比较各组获取的原代细胞数量、细胞存活率 ，以及第 3代细胞在形态、细胞外基质表达情况等方面的差异。结果 随着消化 时间的增加 ，获取的原代细胞数 目越 多，C、D、E组均可获得较理想 的细胞数量 ，但 E组细胞 出现贴壁不 良。 5组第 3代细胞 甲苯胺蓝异染性、I型胶原和 Ⅱ型胶原免疫染色均呈阳性，但 C、D组较其他三组着色更深。结论 用序 贯消化法分离培养兔纤维环细胞 ，Ⅱ型胶原酶的最佳消化时间为3～4h。 【关键词】 纤维环细胞 ；细胞培养 ；Ⅱ型胶原酶；生物学特性 【中图分类号】 Q 331 【文献标志码】 A doi：10．3969／j．issn．1672—3511．2017．02．004 Theexperimentalstudyofdigestion timeeffectson thebiological characteristicsofannulusfibrosuscell YANG Fei ，XIAO Dongqin ，FENG Gang ，LIU Kang2，XIANG Xiaocong3，DENG Li (1|SouthwestMedicalUniversity，Luzhou646000，Sichuan，China； 2．InstituteofTissueEngineeringandStem Cells，NanchongCentralHospitalandTheSecondClinicalInstituteof NorthSichuanMedicalCollege，Nanchong637000，Sichuan，China) [Abstract] Objective Toinvestigatethebestdigestiontimeforisolationofannulusfibrosuscellandtheeffectsof digestiontimeonthecellbiologica1characteristics．Methods 20New Zealandwhiterabbitwererandomlydividedinto A ，B，C，D and E group．Aftertherabbitwasexecutedwith air，Theannulusfibrosuswastakenfrom New Zealand whiterabbitsanddigestedwithtrypsaseandcollagenaseIIforisolatingannulusfibrosuscel1．TypelIcollagenasediges— tiontimeofA ，B，C，D andE groupwere1，2，3，4and5h，respectively．Then，thecellswerecultivatedinDMEM cultureme