遗传学研究方法与技术实验课件2010-5.pptVIP

遗传学方法与技术实验 实验一 植物有丝分裂过程的观察及根尖压片技术 3 实验二 细胞减数分裂制片与减数分裂过程的观察 3 实验三 果蝇的收集、饲养及形态识别 3 实验四 植物染色体的加倍与鉴定 3 实验五 花粉育性镜检 3 实验六 染色体核型分析 3 实验二、植物有丝分裂过程的观察及根尖压片技术 【目的要求】 1、从遗传学方面观察有丝分裂，识别各时期。 ２、掌握压片方法。 【实验原理】 　　 有丝分裂是生物体细胞繁殖的主要方式，包括前、中、后、末四个分裂时期，其中中期染色体最短，且排列在赤道板上，比较分散，有利计数，为了获得更多的中期染色体装片，可采用药物处理或冰冻处理的方法，阻止纺锤体的形成，使细胞分裂停止在中期，染色体缩短变粗，易于分散，便于进行观察研究。 【实验用品】 1、材料：蚕豆（Vicia faba,2n=12）的根尖 2、仪器、用具及药品：生物显微镜、擦镜纸、载玻片、盖玻片、酒精灯、刀片、不锈钢镊子、恒温水浴锅、香柏油、秋水仙素、甲醇、冰醋酸、无水乙醇、二甲苯等。 【操作方法】 1、取材：将蚕豆种子萌发,取根长1cm-2cm的侧根。 2、预处理：将材料切下放入以下溶液：0.05～0.2％秋水仙碱水溶液中处理2～5小时；或：对二氯苯饱和水溶液中处理3-5小时；或：8-羟基奎啉(0.004～0.005％)，处理2～12小时；或：在0～3℃下冷冻处理24小时。 3、 固定：通常用95％酒精—冰醋酸(3：1)固定液固定1～24小时。固定后换入70％酒精中保存。一般可保存1～2星期，如放入冰箱中(3～8℃)则可保存数月。 4、解离：将保存在70％酒精中的根尖，用蒸馏水漂洗几遍，然后移入1mol/L盐酸中，在60℃的水浴中解离15分钟。（如果解离不好，用45%醋酸软化20分钟） 5、 水洗：用蒸馏水洗净残留盐酸或醋酸。 6、染色：将根尖放在载玻片上，切下顶端1-2mm，滴加1滴改良卡宝品红染液进行染色，5min左右即可。 7、 盖片：迅速捣碎根尖，盖上盖玻片。 8、 烤片：将载玻片背面在酒精灯上来回晃动地烤1-2次，温度不能过高，以手背试之有烫感即可。 9、 压片：用铅笔的橡皮头轻轻敲打盖玻片，分生组织细胞即铺成薄薄一层，然后用滤纸吸去多余染液。 10、镜检：标本片置于载物台上------先于低倍镜（10×）观察------高倍镜（40×）------适量调节粗、微调焦螺旋至看清材料------镜下观察，并绘图。 注意事项与作业 【注意事项】 ①盖玻片受力要均匀。 ②敲击的力度要掌握好。 ③在压片或敲片的过程中一定勿使盖片移动，否则易使细胞卷曲，影响观察。 ④染液不能滴多，以刚好布满盖片为度，否则压片时会使细胞逸出盖片。 【作业】 根据观察结果绘制有丝分裂过程图并标明时期。（请标明放大倍数） 实验三、细胞减数分裂制片与减数分裂过程的观察 【目的要求】 1、?通过实验熟练掌握减数分裂时期的主要特征，及染色体行为的动态变化； 2、?学习并掌握植物细胞减数分裂染色体标本的制作方法。 【实验原理】 【实验用品】 1、材料：黑麦（Secale.cereale，2n=14）的幼穗。 2、用品：镊子、解剖针、载玻片、盖玻片、吸水纸、刀片、酒精灯等。 3、药品：无水乙醇、冰醋酸、醋酸洋红、改良苯酚品红、香柏油、二甲苯等。 【操作方法】 1、取材和固定：取减数分裂的黑麦幼穗材料，用冰醋酸与无水乙醇以1：3新鲜配制的固定液进行固定24h以后，将材料转入70%乙醇中保存，放入冰箱冷藏室备用。 2、染色、涂片和盖片：取花序，剥离颖壳，得到纯净花药，立即滴一滴染液，用镊子尖部切断并轻压花药，使花粉母细胞挤出并悬浮于染色液中，用镊子将花药壁等残渣清除干净，适当涂匀玻片，然后盖上盖玻片。 3、烤片：酒精灯上进行晃动烤片，烤至手背感觉发烫即可。 4、压片：垫一张滤纸，以拇指对准材料正中，用力干净快捷的均匀按压一下，吸去多余染液。 5、敲片：用铅笔的橡皮头轻轻敲打盖玻片，细胞即铺成薄薄一层，然后用滤纸吸去多余染液。 6、镜检：将材料压好后，放置显微镜下仔细观察，先在低倍镜下寻找花粉母细胞，观察到有一定分裂相的花粉母细胞后，用高倍镜观察减数分裂各时期染色体的行为和特征。 注意事项与作业 实验一、果蝇的收集、