专题一基因工程 1.2基因工程的基本操作程序.pptVIP

(3)目的基因表达时，RNA聚合酶识别和结合的位点是__________，其合成的产物是________。 (4)在上述实验中，为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用的酶是____________________________________________。 【解析】（1）将含有目的基因的DNA与质粒用EcoRⅠ酶切开后，可形成许多有相同末端的DNA片段，再用DNA连接酶连接起来后，可形成目的基因与目的基因、目的基因与载体、载体与载体连接的重组DNA分子，而基因工程所需要的是目的基因与载体的连接物，所以对以上三种DNA分子片段进行分离提纯，以获得基因工程所需要的。 (2)质粒是原核生物细胞中的一种DNA分子，所以对以上连接物，只有载体与载体的连接物能生活在原核生物宿主细胞内。而目的基因与载体连接物、载体与载体的连接物都含有完整的青霉素抗性基因，所以可生活在含有青霉素的培养基上。 (3)目的基因表达时，RNA聚合酶与启动子结合，催化DNA分子转录为信使RNA分子。 (3)目的基因表达时，RNA聚合酶与启动子结合，催化DNA分子转录为信使RNA分子。 (4)为了防止目的基因与质粒表达载体的任意连接，可同时选用EcoRI酶与BamHI酶切割目的基因和质粒，这样形成的目的基因两个末端分别有不同的核苷酸序列，而质粒的两个末端也是分别有不同的核苷酸序列，这样就能保证目的基因只能与质粒结合了。 【答案】(1)目的基因——载体连接物载体——载体连接物目的基因——目的基因连接物分离纯化 (2)载体——载体连接物目的基因——载体连接物、载体——载体连接物 （3）启动子mRNA （4）EcoRⅠ和BamHⅠ 【易误警示】①切割质粒和目的基因的限制酶必需是同一种酶，以获得互补的黏性末端，利于重组质粒的构建。 ②插入的目的基因只是结构基因部分，其表达需要调控序列，因而用作载体的质粒的插入部位前须有启动子，后须有终止子。 例2 （广东高考）天然酿酒酵母菌通常缺乏分解淀粉的酶类，用做发酵原料的淀粉需经一系列复杂的转化过程才能被利用。研究者从某丝状真菌中获取淀粉酶基因并转入酿酒酵母菌，获得的酿酒酵母工程菌可直接利用淀粉产生酒精。请回答下列问题： (1)将淀粉酶基因切割下来所用的工具是___，用____将淀粉酶基因与载体拼接成新的DNA分子，下一步将该DNA分子__________，以完成工程菌的构建。 (2)若要鉴定淀粉酶基因是否插入酿酒酵母菌，可采用的检测方法是_________；若要鉴定淀粉酶基因是否翻译成淀粉酶，可采用______检测。将该工程菌接种在含淀粉的固体平板培养基上，培养一段时间后，加入碘液，工程菌周围出现透明圈，请解释该现象发生的原因______________________________。 (3)如何进一步鉴定不同的转基因工程菌菌株利用淀粉能力的大小? (4)微生物在基因工程领域中有哪些重要作用? 【解析】该题主要考查了基因工程的过程及应用。 （1）基因工程中的工具酶是限制酶和连接酶。两者作用相反，限制酶能把目的基因和载体切割出相同的末端，而连接酶能把被切割的目的基因和载体通过形成磷酸二酯键连接起来，形成新的DNA分子。重组的DNA分子必须经过一定的方法导入受体细胞，最终得到含有目的基因的工程菌。 （2）要鉴定工程菌中是否含有目的基因，可以利用DNA探针通过DNA分子杂交原理检测的目的基因是否存在。如果要检测目的基因是否表达，可采用抗原—抗体杂交原理，检测特定蛋白质是否存在。 （3）将不同的工程菌分别接种在含有等量的淀粉的固体培养基上，一定时间后，加入碘液，不显蓝色的透明圈就是淀粉被分解的地方，透明圈越大，说明工程菌分解淀粉的能力越强。 （4）微生物体积微小、代谢速率快，常作为受体细胞来接受目的基因，经过代谢来生产大量相应的产物；微生物种类繁多，很多具有侵染性，可用来作为导入受体细胞的媒介；微生物中含有多种限制酶，为基因工程的操作提供工具。 【答案】（1）限制酶（限制性核酸内切酶）DNA连接酶导入受体细胞 （2）DNA分子杂交技术抗原—抗体杂交 出现透明圈是因为淀粉被淀粉酶水解了，说明淀粉酶基因已经翻译成淀粉酶。 （3）可将不同的工程菌分别接种到含有等量的淀粉的固体培养基上，一段时间后，加入碘液，不显蓝色的透明圈就是淀粉被分解的地方，透明圈越大，说明工程菌分解淀粉的能力越强，从而可确定转基因工程菌菌株利用淀粉能力的大小。 （4）作为受体细胞，获取限制酶等。 【归纳总结】（1）在不同层次上目的基因的检测和鉴定可以概括为： （2）在DNA分子、mRNA分子上检测目的基因是否插入、目的基因是否转录时，用的探针都是标记的DNA分子。 是否达到相应的层次 观察是否出现杂交带、杂交